权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

転写制御因子GATAの分解制御の機構

控制转录因子GATA降解的机制

基本信息

批准号：
10163223
负责人：
前田正知
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10163223/
关键词：
GATA因子 GATA6 DNA結合蛋白質転写制御因子 Aキナーゼプロテアソーム変異株

项目摘要

特異的蛋白の分解経路にかかわる因子を遺伝学的に解析することを目指し、ブラストサイジンデアミナーゼ遺伝子のプロモーターにGATA-6の結合配列を2個または8個直列につないだ発現プラスミドを構築した。この発現プラスミドを導入したCHO-K1細胞では、GATA蛋白質依存的にプラストサイジンデアミナーゼを発現することが期待される。実際、GATA-6を発現させたCHO-K1細胞にこのプラスミドを導入すると、プラストサイジン抵抗性を獲得するがジブチリルCAMPを添加するとGATA-6が分解し、したがって抵抗性が消失した。このような細胞を用い、ジブチリルCAMPが存在しても生育できる変異細胞を分離し、細胞内分解経路(すなわちcAMPからプロテアソームにつながる経路)にかかわる因子を明らかにすることが可能になった。そこで、アルキル化剤による変異導入を行った結果、ブラストサイジンに抵抗性を示しジブチリルcAMPか存在しても生育できる変異細胞を複数分離することができた。これまでに6クローンを分離したが、それらの変異細胞の核抽出画分を用いて、ゲルシフト法およびウエスタンブロッティング法によってGATA-6がcAMP存在下に分解しないことを確認した。また、S100画分を調製しプロテアソームの活性を測定する系も確立できた。なを、GATA-6の分解はN末、C末、DNA結合に関わる中央部ともでおきていることが、抗体の反応性およびゲルシフト法により明らかにした。このような成果をもとに、変異部位の同定を行うことが可能になっている。

Specific protein decomposition pathway analysis of the factors in the genetic analysis of the target, the target. The expression of this protein was introduced into CHO-K1 cells, and GATA protein dependent protein expression was expected to occur. In fact, GATA-6 was found in CHO-K1 cells, and the resistance of CHO-K1 cells was increased. The cell cycle, the CAMP cycle, and the intracellular breakdown of cAMP pathways are the factors that may affect the survival of different cells. The results of the study showed that there was no significant difference in the number of different cells. This is the first time that we've seen this. S100 is a highly sensitive and sensitive molecule. The breakdown of GATA-6 is related to the central part of DNA binding, and the anti-GATA-6 activity is related to DNA binding. The results of this study are different from those of the previous study.