胃壁細胞に発現する新しいGATA-DNA結合蛋白質の機能と調節機構

胃壁细胞表达的新型GATA-DNA结合蛋白的功能及调控机制

• 批准号: 06266210
• 负责人: 前田 正知
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06266210/
• 关键词: GATA-DNA結合蛋白質; 胃壁細胞; 胃酸分泌酵素; Znフィンガー; 転写因子; 細胞特異性; 内因子; ビタミンB12

胃壁細胞に発現する新しいGATA-DNA結合蛋白質(GATA-GT1及びGATA-GT2)の機能と調節機構を明らかにするために以下の実験を行った。胃酸分泌酵素のβサブユニット遺伝子の上流約3Kbをシルフェラーゼ遺伝子に連結しHeLa細胞に導入したところ、GATA-GT1もしくはGATA-GT2発現プラスミドを共存させたときに、ルシフェラーゼ活性の著しい増加が観察された。この結果は、両GATA蛋白質がβサブユニット遺伝子の上流にある[(G/C)PuPu(G/C)NGAT(A/T)PuPy配列]を認識して、転写を活性化し得ることを示している。さらに欠失対の作成、部位特異的変異導入を行い詳細に検討したところ、TATAbox上流に存在する2つのモチーフが転写の活性化に必須であることが明らかになった。一方、グルタチオン-S-トランスフェラーゼと融合させたGATA-GT2を大腸菌に発現させ精製した。これを用いてフットプリント法による結合部位の同定を試みたところ、確かに(G/C)PuPu(G/C)NGAT(A/T)PuPy配列を認識していることが示された。さらにin vitroでGATA-GT2のSer-261残基がプロテインキナーゼAによってリン酸化されると、DNA結合能が上昇した。この生理的意義を上記の発現系を用いて調べることが可能になった。その他、ビタミンB12結合蛋白質(内因子)の遺伝子構造を明らかにするとともに、ラットでは胃底腺の主細胞に特異的に発現していることをin situハイブリダイゼーションにより明らかにした。

The functions and regulatory mechanisms of GATA-DNA binding proteins (GATA-GT1 and GATA-GT2) in gastric parietal cells have been revealed. Gastric acid secretion enzyme のβ サブユニット伝子の Upper stream approximately 3Kb をシルフェラーゼ弝子にconnected しHeLa cells したところ, GA TA-GT1もしくはGATA-GT2発成プラスミドを coexistenceさせたときに、ルシフェラーゼActiveの出しい嗗加が観看された.このRESULTは、両GATAproteinがβサブユニット伝子の上流にある[(G/C)PuPu(G /C)NGAT(A/T)PuPy arrangement]をKnowledgeして、転WRITEをActivationしgetることをshowしている.さらに无码対の成、Part-specific variation introductionを行いDetailsに検 Discussionしたところ、TATAbo x The existence of the upper stream must be the activation of the 2つのモチーフが転WRITE and the であることが明らかになった. One side, グルタチオン-S-トランスフェラーゼとfusion させたGATA-GT2 を coliform に発成させ Refined した.これを用いてフットプリント法による Joining part の同determinationをtestみたところ、Confirmationかに(G/C )PuPu(G/C)NGAT(A/T)PuPymatching arrangementしていることがshowされた. The Ser-261 residue of GATA-GT2 in vitro was acidified and the DNA binding energy was increased. The meaning of このphysiology is that it is possible to use いて to adjust べることが.その多、ビタミンB12-binding protein (intrinsic factor) の伝子structure を明らかにするとともに、ラットではThe main cell of the fundic gland is specific for the に発appears していることをin situハイブリダイゼーションにより明らかにした.