新しい溶血法を用いたマラリア原虫検出システムの開発と寄生機構解明への応用

使用新溶血方法开发疟疾寄生虫检测系统及其在阐明寄生虫机制中的应用

• 批准号: 10166213
• 负责人: 斎藤 あつ子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10166213/
• 关键词: マラリア; Plasmodium; フローサイトメーター; 診断; 溶血; 蛍光染色

本研究は、赤血球を溶血させマラリア原虫を赤血球から遊離し、網状赤血球の影響を取り除き、flowcytometryで通常のDNA,RNA蛍光染色剤によりマラリア原虫を検出するシステムを確立し、研究面及び診断面での本システムの有効性を評価することを目的とした研究である。これまでに以下のような成果を得た。1、培養マラリア原虫を用い、原虫のflow cytometry上の描出区画を決定し、検出限界を求めた。parasitemia0.001-0.005%の感度が得られ、parasitemia0.01%以上で、本法による原虫測定数とparasitemiaとの間に安定した正の相関が得られた。2、同調培養した原虫を調整し顕微鏡的観察の結果と比較することにより、flow cytometry上のステージ別マラリア原虫の描出区画を決定した。3、既存の抗マラリア薬の効果の判定を本システムを用いて行い、従来法(塗抹標本による顕微鏡的観察や[3H]Hypoxanthineの取り込による薬剤効果の判定法)の結果とほぼ同様の結果を得ることができた。4、本システムのマラリア診断への応用の可能性について、7例の患者血液(P.falciparum;4例、P.vivax:3例)の解析を行ない、P.falciparum感染患者について良好な結果を得た。P.vivax患者については描出区画の再検討などの課題を残した。5、本溶血剤の、赤血球膜、マラリア原虫への影響を形態学的に検討した。広く用いられるサポニン溶血に比し、均一で安定した溶血効果が得られたが、電子顕微鏡観察でマラリア原虫細胞質densityの低下を認めた。従って、本溶血剤はサポニンよりマラリア原虫膜への障害はむしろ強い可能性があることが推定された。

The purpose of this study is to investigate the effects of hemolysis on erythrocytes and reticulocytes, and to determine the presence of DNA and RNA in the study area. The following results were obtained. 1. To determine the delineation area of protozoa in culture and flow cytometry, and to determine the detection limit. Parasitemia 0.001 -0.005% sensitivity, parasitemia 0.01% or more, parasite count, parasitemia and positive correlation 2. Homology culture and microscopical observation results were compared to determine the identification of protozoa in flow cytometry. 3. The determination of the effect of the existing anti-hypoxanthine is carried out in the middle of the system, and the method of determining the effect of the existing anti-hypoxanthine is carried out in the middle of the system (the method of determining the effect of the existing anti-hypoxanthine is carried out in the middle of the system). 4. The possibility of diagnosis and use of this system was discussed. 7 cases of blood samples (P. falciparum;4 cases, P. vivax:3 cases) were analyzed. The results of P. falciparum infection were good. P.vivax patient review and re-examination of the problem 5. Morphological analysis of hemolytic agents, erythrocyte membranes and protozoa The results of electron microscopy showed that the cytoplasmic density of protozoa was lower than that of the control group. This is a very good idea.