寄生各ステージにおけるマラリア原虫の蛋白質燐酸化、脱燐酸化酵素の解析と役割の検討

疟原虫寄生各阶段蛋白磷酸化和去磷酸化酶的分析及作用

• 批准号: 09270214
• 负责人: 斎藤 あつ子
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09270214/
• 关键词: Plasmodium; Plasmodium falciparum; マラリア; 蛋白質燐酸化酵素; 蛋白質脱燐酸化酵素; in gel kinase assay; 阻害薬; 赤血球寄生機構

目的本研究の目的は、燐酸化酵素、脱燐酸化酵素の作用薬(阻害薬や活性化薬)を用いた薬理学的解析と、ゲル内燐酸化法などの生化学的解析を組み合わせ、マラリア原虫の燐酸化、脱燐酸化酵素の生理的機能を明らかにすることである。結果と考察1、Calphostin C,Staurosporine,KN62などのCa^<2+>-dependent protein kinaseの阻害剤がP.falciparumのin vitroの増殖を強く制御した。2、P.falciparumの約115-175kDaの5種のprotein kinase、約64kDaのprotein kinaseがtrophozoiteからschizontにかけて強く発現することが観察された。54kDのCa^<2+>-dependent protein kinaseはschizontからtrohozoite期にかけて強く発現する傾向があった。1、2の結果より、Ca^<2+>-dependent protein kinaseは、赤血球期原虫の分裂増殖の制御に関与していることが示唆された。3、Calyculin A、Okadaic acidなどprotein phosphatase 1、2Aの阻害剤がP.falciparumのin vitroの増殖を強く制御し、特にtrophozoiteに強い増殖抑制効果を示した。4、P.falciparumにserine/threonine phosphatase type 1およびtype2活性が存在することが、明らかにされ、protein phosphatase type1活性が優位であった。3、4の結果より、protein phosphatase type1は赤血球期原虫の増殖に必須で、trophozoite期で重要な役割を果していると考えられた。

Objective The aim of this study was to elucidate the biological functions of phosphorylase and dephosphorylase in protozoa by combining the biological analysis and phosphorylation methods. Results 1. Calphostin C,Staurosporine, KN62, Ca^<2+>-dependent protein kinase inhibitors strongly inhibited the proliferation of P. falciparum in vitro. 2. Five protein kinases of P. falciparum (about 115-175kDa) and a protein kinase of about 64kDa were detected. 54kD Ca^<2+>-dependent protein kinase has a strong tendency to schizont and trohozoite. 1, 2 The results showed that Ca^<2+>-dependent protein kinase was related to the control of erythrocytic parasite division and proliferation. 3. Calyculin A, Okadaic acid, protein phosphatase 1, 2A inhibitors, P. falciparum in vitro, especially trophozoite in vitro. 4. P.falciparum serum/threonine phosphatase type 1 and type2 activities exist, and protein phosphatase type1 activity is superior. 3. The results showed that protein phosphatase type1 was essential for the development of erythrocytic protozoa and trophozoite protozoa.