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微小管モーターとその変異体を用いた分子モーター作用機構の階層論的研究

使用微管马达及其突变体进行分子运动作用机制的分层研究

基本信息

批准号：
10175218
负责人：
太和田勝久
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

野性型の分子モータは,細胞骨格繊維と相互作用すると,そのATP分解が活性化され,繊維の一方向性の滑り運動を生じる。分子モータの或る変異体は,野性型分子モータと同様にATP分解は繊維によって活性化されるが,繊維の一方向性の滑り運動を起こすことができず,繊維の一次元的な「双方向性」のランダム運動を起こす。これらの変異体によって生じる繊維の一次元的ランダム運動を非線形動力学解析法などをもちいて詳細に解析することにより,野性型分子モータにあって,これらの変異体モータに欠けているメカニズムを見いだし,分子モータが活性化型ATP分解に共役して「一方向性」の滑り力を能動的に発生する仕組みの解明を目指すのが本研究の目的である。1. 上記の特徴を持つ変異体分子モータとして,微小管モータのひとつであるNCDの,柄部の短い変異体MC5を本研究で用いる。まずGST-MC5という融合タンパクを,大腸菌を用いて発現し,精製単離した。GST-MC5をin vitro滑り運動測定セル中のガラス面に固定して,そのセル中に微小管を加えると、GST-MC5のATP分解が活性化されることを確かめた。次に,GST-MC5をスロンビン処理することで,MC5を切り出したが,分子量的に少し異なる2種類の標本を得た。スロンビンが融合タンパクの異なる2か所を切断するからであることが判明した。2. そこで,単一分子量のMC5を調整するために大腸薗でMC5を直接発現することにした。そのために,現在,pGEX-MC5からPCRでMC5を取り出し,新しくpET-MC5を構築中である。外注したPCR用のプライマーに作成ミスが2度も有ったので、このMC5のベクターの構築が予想より遅れている。3. 実験的に観察されている8nm以下のキネシン・ステップサイズを説明する理論を作った。そして、その計算機実験で8nm以下のステップの生じることを示した。この結果は現在論文に執筆中である。

Wild type molecules interact with each other, ATP decomposition is activated, and a directional sliding movement of the molecule occurs. The molecular structure is different from that of the wild type, and the ATP decomposition is different from that of the wild type. The molecular structure is different from that of the wild type. The ATP decomposition is different from that of the wild type. The aim of this study is to analyze the molecular structure of a wild type molecule in detail by nonlinear dynamic analysis of the one-dimensional kinetic motion of a heterogeneous molecule, and to analyze the molecular structure of a heterogeneous molecule in detail by nonlinear dynamic analysis of the one-dimensional kinetic motion of a heterogeneous molecule. 1. The above characteristics are characterized by the presence of different molecules, the presence of small tubes, and the presence of different MC5 in the stem. The GST-MC5 is a fusion protein, which is produced by E. coli and purified. GST-MC5 in vitro slide motion measurement in the middle of the surface fixed, in the middle of the microtube added, GST-MC5 ATP decomposition activated. In addition, GST-MC5 has been successfully processed, and MC5 has been successfully processed. The molecular weight of MC5 varies from two species. 2. To identify the difference between the two. 2. The molecular weight of MC5 is adjusted to the maximum. Now, pGEX-MC5 is in PCR, MC5 is in construction, pET-MC5 is in construction. For external PCR applications, the structure of the MC5 is designed to be as follows: 3. The theory of the system is described below. The computer is running at a speed of less than 8nm. The result is that the paper is now written.