Rolle eines ClpP-ähnlichen Phagenproteins bei der Entwicklung des Lactobacillus gasseri Bakteriophagen Phi adh.

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ClpP-Proteinasen spielen eine wichtige Rolle beim Turnover cytoplasmatischer Proteine in Bakterien. Sie entfalten ihre proteolytische Aktivität üblicherweise nur dann, wenn sie mit ATP-bindenden Clp-Chaperonen assoziiert sind. Im Zuge der Totalsequenzierung des Genomes des temperenten Lactobacillus gasseri Phagen fadh haben wir erstmals ein Mitglied der ClpPFamilie bei einem Virus nachgewiesen. Bisher sind uns zwei Proteine des Phagen (Mhp, Lys) bekannt, die proteolytisch prozessiert werden und deshalb als ClpP-Substrate in Frage kommen. Das Phagengenom codiert allerdings keine Proteine, die Homologien zu bekannten Clp-Chaperonen aufweisen. Deshalb sind die zentralen Fragen des vorliegenden Antrages (i) welche Funktionen das ClpP-artige fadh-Protein bei der Entwicklung des Phagen wahrnimmt und (ii) ob es dabei mit passenden Clp-Chaperonen des bakteriellen Wirtes zusammenwirkt. Zur Klärung dieser Fragen sollen (i) clp-Gene des Wirtes lb. gasseri identifiziert und ebenso wie clpP von fadh gezielt deletiert werden, (ii) Auswirkungen der Deletionen auf die Phagenentwicklung und auf das Processing subklonierter Phagenproteine in Lb. gasseri untersucht werden und (iii) in vitro-Funktionsanalysen mit gereinigten Clp- und Phagenproteinen durchgeführt werden. Zur Konstruktion der clp-Deletionen haben wir ein Genintegrationssystem für Lb. gasseri etabliert.