環境レポーター機能の発色遺伝子システム

具有环境报告功能的显色基因系统

• 批准号: 10875163
• 负责人: 呉 基鳳
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10875163/
• 关键词: 環境レポーター生物; 発色遺伝子システム; GFP

本研究の目的は、生物的増幅技術を用いて、環境中の毒性汚染物質を高感度かつ迅速に検出できる発色遺伝子システムの開発である。本研究は、環境毒性汚染物質(重金属)関連遺伝子を対象としており、毒性汚染物質の分解酵素および解毒関連タンパクのプロモーターとグリーン蛍光タンパク(GFP)のcDNAを組み込んだプラスミドを用いる。プラスミドカセットとして(1)メタロチオネイン、(2)n-アルカンオキシゲナーゼを用いる。本年度は初年度にあたり、次の項目を実施した。1. 生体材料の調製およびレポーター遺伝子の開発:培養細胞として、酵母Candida albicans KULM83-0300および糸状菌Cladosporium resinaeを培養した。このうち、酵母Candida albicans KULM83-0300に重金属として銅を作用させると、メタロチオネインが誘導されることが明らかとなった。そこで、このタンパク質のN末端アミノ酸配列を決定し、これに基づきcDNAの解析を行った。2. プラスミドの細胞内導入条件の確立:実験材料として、イネの培養細胞を用いた。カリフラワーモザイクウィルス35SRNAのプルモーターにグリーン蛍光タンパク(GFP)を結合したプラスミド(p35S-GFP)をイネ培養細胞に導入した。導入方法は、加圧法を用いた。その結果、1日後にはGFPの蛍光が観察された。このことにより、GFPを用いた発色遺伝子システムの基礎的知見が得られた。

这项研究的目的是开发一个发色基因系统，该系统可以在环境中以高灵敏度检测有毒污染物，并使用生物放大技术快速检测。这项研究的重点是与生态毒性污染物（重金属）有关的基因，并使用质粒，该质粒结合了毒性污染物的启动子，排毒蛋白和绿色荧光蛋白（GFP）的cDNA。作为质粒盒，（1）金属硫蛋白和（2）N-烷氧合酶。今年，第一年实施了以下项目：1。生物材料的制备和记者基因的开发：酵母白色念珠菌Kulm83-0300和丝状真菌cladosporium lesinae被培养为培养细胞。其中，已经揭示了铜被用作重金属，可用于由诱导的金属硫蛋白诱导的酵母白色念珠菌Kulm83-0300。因此，确定该蛋白的N末端氨基酸序列，并基于此分析cDNA。 2。建立细胞内引入质粒的条件：培养的水稻细胞用作实验材料。将质粒（p35s-GFP）与花椰菜镶嵌病毒35sRNA（GFP）的拉动运动结合到水稻培养细胞中。引入方法是通过压力方法执行的。结果，一天后观察到GFP荧光。这为使用GFP提供了成色基因系统的基本知识。

项目成果

Ki-Bong Oh: "Isolation and Properties of an Extracellular β-Glucosidase from Hydrocarbon-Utilizing Fungus Cladosporium resinae." Biosci.Biotech.Biochem.63(2). 281-287 (1999)

Ki-Bong Oh：“利用碳氢化合物的真菌枝孢菌的胞外 β-葡萄糖苷酶的分离和特性。Biosci.Biotech.Biochem.63(2) (1999)。

Yasuhiro Iida: "Detection of Antifungal Activity in Anemarrhena asphodeloides by Sensitive BCT Method and Isolation of Its Active Compound." J.Agricul.Food Chem.47(2). 584-587 (1999)

Yasuhiro Iida：“通过灵敏 BCT 方法检测知母的抗真菌活性并分离其活性化合物。”

Ki-Bong Oh: "In Vivo Evaluation of Antifungal Activity of Antifungal Drug by Simulating the in Vivo Pharmacokineties of the Drug against Fungal Hyphal Growth." Jpn.J.Med.Mycol.39. 173-178 (1998)

Ki-Bong Oh：“通过模拟抗真菌菌丝生长药物的体内药代动力学来体内评价抗真菌药物的抗真菌活性。”