多電極皿記録法による,培養胎仔鼻板GnRHパルス発生器電気活動の記録

多电极盘记录法记录培养胎儿鼻板GnRH脉冲发生器电活动

• 批准号: 10877013
• 负责人: 田中 冨久子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877013/
• 关键词: GnRHニューロン; 鼻板; 器官培養; 多点電極皿; 細胞外電気活動記録; ラット

1. GnRHニューロンの培養胎生13.5日齢のラット胎仔の鼻板と視床下部を別々に実体顕微鏡下で切り出し,あらかじめコラーゲンを処置した多点電極皿に静置し,器官培養を開始した。しかしながら,5-6日で,細胞は全面に広がり細胞密度が高すぎ,電気活動期録には不向きと考えられた。そこで,分裂阻止剤を処置し,この問題を解決した。後述する如く,培養は鼻板のみとした。2. 電気活動の記録培養7日目より電気活動期録を開始した。当初,ノイズに悩まされたが,適時アース等を設置することにより,安定した記録が可能となった。このシステムを用いて活動電位と思われるいくつかの細胞外記録に成功したが,(1)期待した周期性がない,(2)鼻板の細胞のものからなのか視床下部のものからなのか不明,(3)予測より発火活動が少ない,等の問題点が明らかとなった。そこで当初予定していたオフラインでの活動電位の解析は,パルスカウンターにより単位時間当たりのスパイク数を計測することにした。本方法は,当教室で行っている多ニューロン発射活動記録の解析法である。また,他の実験から,培養液中にGnRHが蓄積するとパルス状のGnRH分泌が抑制されることを示唆する結果を得たため,環流系を構築することにした。培養は鼻板のみとした。電極皿および導出装置は,37℃に保たれた自家製チャンバー内に設置し,保温装置からのノイズを極力押さえた。培養液を人工脳脊髄液に変更し,毎分150μlで環流することにした。このシステムで,単一鼻板からの記録を行っている。現在の問題点は,環流液吸引中に発生するノイズである。3. 今後の実験の方向性(1)よりノイズの少ないシステムを構築する。(2)20-30分周期の電気活動が記録されたものにGnRHの蛍光免疫組織化学を行い,GnRHニューロンの位置と電気活動との関係を検討する。(3)環流液中のGnRHを測定し,電気活動との相関を検討する。

1. GnRH ニ ュ ー ロ ン の cultivate viviparous 13.5 day 齢 の ラ ッ ト tire tsai の nose と depending on the bed bottom を don't 々 に be body 顕 micro microscopically で り し, cutting あ ら か じ め コ ラ ー ゲ ン を 処 buy し た multipoint electrode plate に let stand し, organ culture を began し た. し か し な が ら, 5-6 で, cell は comprehensive に hiroo が り high cell density が す ぎ, electric 気 activity recorded に は to き と exam え ら れ た. Youdaoplaceholder0 そ で で, the treatment of the splitting inhibitor を is そ, the <s:1> problem を is solved た た. The following する as く, cultivate the する nasal plate みと た た. 2. The record of the 7-day period of the electrical activity is よ よ, and the record of the electrical activity starts を た. At the beginning, ノ イ ズ に 悩 ま さ れ た が, timely ア ー ス を Settings such as す る こ と に よ り, settle し た may record が と な っ た. こ の シ ス テ ム を with い て activity potential と think わ れ る い く つ か の extracellular recording に successful し た が, (1) expect し た periodic が な い, (2) the nose の cells の も の か ら な の か depending on the lower part of the bed の も の か ら な の か unknown, (3) to measure よ り 発 fire activity less が な い, の problems such as point が Ming ら か と な っ た. そ こ で had designated し て い た オ フ ラ イ ン で potential analytical は の の activity, パ ル ス カ ウ ン タ ー に よ り 単 a time when た り の ス パ イ ク number を measuring す る こ と に し た. This method, when the classroom で rows って る る multiple ニュ ロ ロ ロ shooting activity records <s:1> analytical method である. ま た, he の be 験 か ら, medium, に GnRH が accumulation す る と パ ル ス shape の が GnRH secretion inhibition さ れ る こ と を in stopping す る results た を た め, SCF を build す る こ と に し た. Cultivate the みと nasal plate た. Electrode plate お よ び は export equipment, 37 ℃ に bartender た れ た their system チ ャ ン バ ー し に set inside, heat preservation device か ら の ノ イ ズ を to detain さ え た. Culture medium を artificial 脳 spinal cord fluid に change <s:1>, 150μl per minute で circulation する とに とに た た. <s:1> システムで システムで,単 one nasal board ら ら システムで record を lines って る る る. Now the problem point is. In the suction of the circulating fluid, に occurs するノ ズである ズである ズである. 3. In the future, <s:1> practical <s:1> directionality (1)よ よ ノ ズ ズ ズ <s:1> less な システムを システムを construction する. (2) 20-30 cycle の electrical 気 activity が さ れ た も の に GnRH の 蛍 light immunohistochemical を い, GnRH ニ ュ ー ロ ン の position と electric 気 activity と の masato is を beg す 検 る. (3) Determination of <s:1> GnRHを in the circulation liquid を, and discussion on the correlation between と and <s:1> of electrical activity する.