ヒト培養肥満細胞の形質転換モデルの確立とメカニズムの解明

培养人肥大细胞转化模型的建立及机制的阐明

• 批准号: 10877132
• 负责人: 宮地 良樹
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877132/
• 关键词: 肥満細胞; 形質転換; トリプターゼ; キマーゼ; 線維芽細胞; 共生培養; 細胞内カルシウム; 微細構造; 電顕的観察; トリプタ-ゼ; キマ-ゼ

これまでに、臍帯血中の血液幹細胞をstem cell factorとインターロイキン6共存下に培養して得られるヒト肥満細胞は、組織化学的には従来の報告以上にキマーゼ陽性率が高いこと、その一方で細胞顆粒の電顕的観察では、依然として未熟な粘膜型肥満細胞(MCT型)と考えられる構造を有し、皮膚結合組織型(MCTC型)を思わせる構造は認められないことを明らかにした。そこで、線維芽細胞との共生によってヒト肥満細胞がMCT型からMCTC型へと形質転換するのか否かを確認するため、今年度は化学伝達物質遊離能およびそれに先だって認められる細胞内カルシウム濃度の上昇に注目して検討を行った。既に報告したように、臍帯血由来培養ヒト肥満細胞は免疫化学的にはキマーゼ陽性のMCTC細胞と陰性のMCT細胞が様々な比率によって混在しているので、まず共焦点レーザー顕微鏡を用いFura-2をインディケーターとして、細胞1つ1つのレベルでの細胞内カルシウムの流入を検討できる系を確立した。この結果、ヒト骨髄腫IgEで授動感作した細胞を抗IgE抗体て架橋して刺激した場合には、ヒスタミンの流出に先立って細胞膜周辺部からカルシウム濃度の上昇が起こること、逆にcalcium ionophoreA23187を用いて細胞を刺激した際には細胞中心部、おそらくは核内からカルシウム濃度の上昇が引き起こされることを確認した。しかしながら、MCTC型肥満細胞の特徴の1つとされるcompound 48/80あるいはsubstance P による脱顆粒反応の検討を行うと、臍帯血由来培養ヒト肥満細胞ではカルシウム濃度の上昇は確認できなかった。線維芽細胞との共生を行った細胞を用いた検討では、今回の系では細胞の同定が困難であり充分量の細胞の観察が行えなかったが、依然としてcompound 48/80あるいはsubstance P による細胞内カルシウム濃度の上昇は来していないようであった。以上、線維芽細胞との共生によって皮膚結合組織型肥満細胞を誘導・確立することは困難であることが明らかとなったので、今後は皮膚結合組織型肥満細胞の確立という観点から、皮膚から肥満細胞を抽出しこれを長期間培養する系の確立を検討していく予定である。(この手法についてはすでに並行した研究で実現可能となっている。Blood誌に掲載予定)

The stem cell factor in umbilical cord blood was detected by histochemical method. The positive rate of stem cell was high. The structure of cell granules in umbilical cord blood was studied by histochemical method. Skin binding tissue type (MCTC type) In addition, the increase in intracellular cell concentration of MCT-type, MCTC-type, and MCTC-type cells was identified. In addition, the ratio of positive MCTC cells to negative MCT cells was mixed in the middle of the study. The ratio of positive MCTC cells to negative MCT cells was mixed in the middle of the study. The ratio of positive MCTC cells to negative MCT cells was mixed in the middle of the study. As a result, anti-IgE antibody bridging was confirmed in the cells stimulated by calcium ionophore A 23187 in the central part of the cell and in the nucleus. The characteristics of MCTC type fat cells were determined by compound 48/80. The increase in the concentration of MCTC type fat cells in umbilical blood culture was confirmed by the increase in the concentration of MCTC type fat cells. The cells in the cell line were found to be symbiotic, and the cells in the cell line were found to be symbiotic. The cells in the cell line were found to be symbiotic, and the cells in the cell line. As mentioned above, it is difficult to induce and establish skin-combined tissue-type fat cells during the symbiosis between linear bud cells and tissue cells. However, it is clear that in the future, the establishment of skin-combined tissue-type fat cells and the establishment of a system where skin-combined tissue-type fat cells can be extracted and cultured for a long time will be discussed and determined. (This method is not only applicable to parallel research, but also possible.) Blood Annals are scheduled.

项目成果

Hiroo Amano,Motohiro Kurosawa,Osamu Ishikawa,Junichi Chihara,Yoshiki Miyachi: "Cultured human mast cells derived from umbilical cord blood cells in the presence of stem cell factor and interleukin-6 cannnot be a model of human skin mast cells : fluorescen

Hiroo Amano、Motohiro Kurosawa、Osamu Ishikawa、Junichi Chihara、Yoshiki Miyachi：“在存在干细胞因子和白细胞介素 6 的情况下，从脐带血细胞中培养的人类肥大细胞不能成为人类皮肤肥大细胞的模型：荧光

Motohiro Kurosawa: "Response to cvclosporin and low-dose methyl-predonisolone in aggressive systemic mastocytosis"J Clin Allergy Immunol. 103. S412-420 (1999)

Motohiro Kurosawa：“对侵袭性系统性肥大细胞增多症中环孢素和低剂量甲基泼尼松龙的反应”J Clin Allergy Immunol。

宮地良樹: "アレルギーナビゲーター"メディカルレビュー社(印刷中).

Yoshiki Miyaji：“过敏导航”医学评论出版（正在出版）。

Motohiro Kurosawa: "Effect of mast cell-derived mediators and mast cell-related neutra proteases on human dermal fibroblast proliferation and type I collagen production" J Allergy Clin Immunol. in press.

Motohiro Kurosawa：“肥大细胞衍生介质和肥大细胞相关中性蛋白酶对人真皮成纤维细胞增殖和 I 型胶原蛋白产生的影响”J Allergy Clin Immunol。

Naotomo Kanbe: "Fubrogenic cytokines from cord blood-derived human cultured mast cells." J Allergy Clin Immunol,. in press.

Naotomo Kanbe：“来自脐带血来源的人类培养肥大细胞的纤维细胞因子。”