腫瘍ワクチン療法による骨肉腫遺伝子治療の基礎検討

利用肿瘤疫苗疗法进行骨肉瘤基因治疗的基础研究

• 批准号: 10877228
• 负责人: 朝長 匡
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877228/
• 关键词: 骨肉腫; 遺伝子治療; リポゾーム

骨芽細胞株であるROS、MC3T3-E1細胞をヌードマウスの皮下に播種させ、腫瘍モデルを作成した。これに自殺遺伝子であるチミジンキナーゼ(Tk cDNA)をマウス由来の約1kbから成るオステオボンチンプロモーターの下流に組み込んだベクターを、阪大金田助教授より供与していただいた膜融合型リポゾーム法で調整した。そして腫瘍が直径2cmの大きさに増大したところで、直接あるいは皮下投与で1週間の間隔をあけ、計3回投与した。その後、経時的に腫瘍のサイズや性状を観察し、その治療効果を追跡した。その結果、コントロール群では10匹の全マウスで腫瘍が経時的に増大し、そのうち6例が投与開始後3ヶ月の時点まで死亡したが、12例の皮下投与群で投与後三ヶ月において、コントロールの約半分に腫瘍のサイズは縮小した。腫瘍内直接投与群では13匹のマウス中6例に完全に腫瘍の消退を見た。そして投与後経時的に屠殺し、採取した腫瘍の組織学的検索から、壊死部ではアポトーシス様変化が観察された。さらにその周辺部ではバイスタンダード効果が観察された。TUNEL染色でDNAの断片化を確認すると共に、一部の標本を透過型電顕で観察したところ、アポトーシスに典型的な形態変化を伴っている事を確認した。そこでこのアポトーシス機構のメカニズムを解明するため、種々の抗体を用い、免域組織化学、ウェスターンブロッティングで検討したところ、アポトーシス部の辺縁でFasが過剰発現している事が判明した。今後上記のデータを整理し、論文投稿する予定である。

Bone bud cell line ROS and MC3T3-E1 cells were cultured subcutaneously and then cultured. The gene sequence of this gene is about 1kb. The gene sequence of this gene is about 1kb. The diameter of the tumor is 2 cm, the diameter of the tumor is 2 cm, and the diameter of the tumor is 2 cm. After the treatment, the treatment effect was tracked. The results were as follows: 10 cases of subcutaneous injection were found to be dead 3 months after the start of injection; 12 cases of subcutaneous injection were found to be dead 3 months after the start of injection; 10 cases of subcutaneous injection were found to be dead 3 months after the start of injection; 12 cases of subcutaneous injection were found to be dead 3 months after the start of injection; 10 cases of subcutaneous injection were found to be dead. 13 cases of direct injection into the tumor and 6 cases of complete tumor regression The histological examination of the tumor was carried out at the time of injection and post-injection. All right, so we're going to have a look around the corner. TUNEL staining confirms DNA fragmentation, part of which is observed by transmission electron microscopy. The results of the study showed that there was no significant difference between the two groups. In the future, the paper will be organized and submitted.

项目成果

M.Narimatsu,et al: "Therapeutic usefulness of wild-type p53 gene introduction in a p53-null anaplastic thyroid carcinoma cell line" J Clin Endocrinol Metab. 83,10. 3668-3672 (1998)

M.Narimatsu 等人：“在 p53 缺失的间变性甲状腺癌细胞系中引入野生型 p53 基因的治疗用途”J Clin Endocrinol Metab。

Nagayama et al.: "Enhanced efficiency of trans criptionally targeted ・・・"Cancer Research. 59・13. 3049-3052 (1999)

Nagayama 等人：“转录靶向的效率提高”癌症研究 59・13（1999）。

Kawashita et al.: "Regression of hepatocellalar carcinama in vitro and ・・・"Human Gene Therapy. 10(9). 1509-1519 (1999)

Kawashita 等人：“体外肝细胞癌的消退和……”人类基因治疗 10(9) (1999)。

T.Tsukazaki et al: "SARA,a FYVE domain protein that recruits Smad 2 to the TGFβ receptor." Cell. 96,6. 779-791 (1998)

T.Tsukazaki 等人：“SARA，一种将 Smad 2 招募到 TGFβ 受体的 FYVE 结构域蛋白。” 779-791（1998）。

V.Braiden et al: "Retrovirus-mediated suicide gene/prodrug therapy targeting thyroid carcinoma using a thyroid-specific promoter" Endocrinology. 139,9. 3996-3999 (1998)

V.Braiden 等人：“使用甲状腺特异性启动子针对甲状腺癌的逆转录病毒介导的自杀基因/前药疗法”内分泌学。