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ホメオボックス遺伝子Cart1の軟骨分化誘導能と発現形式の解析

同源盒基因Cart1的软骨分化诱导能力及表达格式分析

基本信息

批准号：
12877226
负责人：
朝長匡
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ラット軟骨肉腫由来細胞株RCSから2種のalternative splicingによるものと思われるアイソフォームを同定した。RCS細胞は豊富にCart1を発現するにも関わらず、Cart1を含めたpaired-classホメオ蛋白のDNA結合配列であるATTANNNTAATを組み込んだルシフェラーゼアッセイではその活性を上昇させなかった。我々はこの現象は前記のアイソフォームとの競合的2量体形成にもとずくものではないかと推定した。そこでまずCart1の機能ドメインの同定を試みた。GAL4アッセイから転写活性ドメインはホメオドメインのC末に存在し、核移行シグナルはホメオドメインの両端の2ケ所に存在することを確認した。また野生型の転写活性能をN,C末のフラグメントは濃度依存性に抑制した。In vivo,two-hybrid法による結合ドメインの解析から、Cart1のN,C末はそれぞれ直接に蛋白-蛋白で結合することが判明した。しかし、各種細胞株や各時期のマウス胎仔を使ったRT-PCRではRCS細胞から同定された2種類のスプライシングバリアントは細胞株の中でも数種のみに発現していた。結論として、Cart1はそのN,C末がそれぞれC,N末に会合することで、2量体を形成し、胎生期の四肢発生や軟骨分化を制御しているものと推測された。そして腫瘍細胞のみで発現する2種類のスプライシングバリアントフォームは野生型の活性をドミナントネガティブ的に作用することで、軟骨分化を抑制している可能性が示唆された。今後さらに検討を重ねることで軟骨肉腫の腫瘍化メカニズムの解明にもつながるものと考えられる。以上の結果は、国内外の学会に発表するとともに(日本整形外科基礎学術集会、アメリカ内分泌学会)、現在論文投稿に向けて準備中である。

Chondrosarcoma derived cell line RCS has two alternative splicing patterns. RCS cells contain paired-class proteins and DNA binding sequences. The phenomenon of "I'm sorry,""I'm sorry,""I'm sorry." The Cart1 function is displayed in the same way as the Cart1 function. GAL4 is active, and the presence of the C terminal of the G terminal is confirmed. The activity of wild-type DNA is inhibited by concentration dependence at the end of N,C. In vivo, the two-hybrid method was used to determine the binding of protein to protein directly. RT-PCR was used to identify two types of RCS cell lines and several types of RCS cell lines. Conclusion: Cart1 and Cart2 may be involved in the formation of somatic cells and the development of cartilage in the fetal period. The possibility of inhibition of cartilage differentiation was demonstrated by the presence of two types of cartilage differentiation in the wild type of tumor cells. In the future, we will discuss the issue of cartilage swelling. The above results are expected to be presented to international and domestic societies (Japan Plastic Surgery Foundation Academic Conference, Society of Endocrinology) and to be submitted to the current paper.