蝸牛外有毛細胞細胞膜モーター蛋白質のクローニング

耳蜗外毛细胞膜运动蛋白的克隆

• 批准号: 10877263
• 负责人: 高坂 知節
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877263/
• 关键词: 蝸牛; 外有毛細胞; cDNA; モルモット; モーター蛋白質

モルモット蝸牛より、顕微鏡下に主に外有毛細胞と周辺の支持細胞からなる細胞塊を採取した。PCRを行わず菫接二重鎖cDNAを作製した。これを平滑末端にてプラスミドベクターpKF3に連結し、大腸菌に形質導入しコロニーを採取した。1567個のコロニーを解析したところ、1028個にcDNAの挿入が確認された。挿入断片の長さは様々であったが、おおよそ200bp以上のクローンを解析することとした。結果として175個の塩基配列を解読した。ベクター由来の配列は7個、rRNA由来の配列は18個であり、そのほかの150個がモルモットcDNA由来の配列と考えられた。ホモロジー解析の結果、ベータグロビン遺伝子と思われるクローンが最も多く検出された。150個のうち58個はオープンリーディングフレームを持ち、蛋白質コード領域の可能性があった。これらの中でモチーフ解析を行い、膜蛋白の可能性を有するクローンは8個であった。クローンの多くは非翻訳配列であると予想されるため、オープンリーディングフレームを持たないクローンも解析していく必要があると考えられた。この点についてはRT-PCR法にて解析中である。現在の段階では外有毛細胞モーター蛋白質cDNAを同定することはできなかったが、それに繋がる有益な情報を多く得ることができた。このような蝸牛のショットガンクローニングは海外で行われているがmRNAが少量のためcDNAをPCRで増幅している。そのため、蝸牛での発現量を正確に反映しているとはいえない。今回の研究ではPCRを用いていないためより正確なmRNAの発現状況に関するデータを集めることができた。

There are hairy cells outside the main body under the microphone and the microphone. The cycle supports the cell selection. The PCR will follow the double cDNA to make the decision. Smooth the end, smooth the end, pKF3 the link, the big fungus, enter the box, get the button. 1567 customer requests and 1028 cDNA messages were entered into the confirmation account. Enter the fragment in a long way, so that you can read the data above 200bp and parse the data. Results A total of 175 patients were assigned to solve the problem. The origin of the cDNA is 7, the origin of the rRNA is 18, and the origin of the Township is 150. There is an examination of the origin of the college. After analyzing the results, you need to analyze the results, and you will find that you have the most frequent errors. One hundred and fifty-eight two-year-old and 58-year-old governments have registered the possibility of holding and protein trading in the field. In order to analyze the possibility of membrane protein analysis and membrane protein analysis, there are 8 important data in this paper. I don't want to tell you what I want to do. I don't want to. I don't know. I don't want to. I don't want to know. The RT-PCR method is in the process of parsing. Now there are hairy cells, protein cDNA, protein, protein and protein. I don't know what to do. I don't know. I don't know, I don The amount of food and beefy food correctly reflects the accuracy of the food supply. This time, we have studied the current situation of PCR by using the correct information system of mRNA. We need to know that the collection of information is correct.