ネックレス型嗅覚 糸球体複合の構造解析

昨年度の研究結果として、Mab213抗体陽性嗅覚系もラット一次嗅覚系においてネックレス型嗅覚系を形成し、酵素組織化学的染色によるアセチルコリンエステラーゼ(AchE)強陽性糸球体と隣接関係にあり、その陽性構造の嗅球内分布及び嗅上皮内分布も明らかにされた。これらの結果を踏まえ、本年度は、電顕解析により、Mab213陽性ネックレス型糸球体とAchE強陽性糸球体様構造の超微細構造を明らかにした。Wistar系雄ラットを4%パラホルムアルデハイド、0-1.0%グルタールアルデハイド、リン酸緩衝混合液で灌流固定し、ラット嗅球ならびに鼻腔(脱灰標本)の前頭断切片をビブラトームあるいはクライオスタットによる凍結切片を作成後、Mab213抗体を用いた免疫組織化学およびAchEの酵素組織化学に供し、光顕および電顕レベルで検索を行った。鼻腔粘膜においては、Mab213陽性嗅覚受容体細胞は主に鼻腔尾側端背側部、特に鼻甲介のT1周囲および鼻中隔に接した鼻腔天井部に分布しており、その他、散在性に分布する陽性細胞が他の鼻腔後端粘膜にも観察された。嗅球では、最尾側でMab213陽性糸球体が全周を囲むように数珠状にネックレスパターンを呈して分布していた。またこれらMab213陽性糸球体は常にAchE強陽性の糸球体に隣接して存在していた。ネックレス型糸球体はトルイジンブルー染色で他の典型的な糸球体と同様な暗調小結節を有し、AchE強陽性糸球体は、暗調結節を有しない異型糸球体であり、免疫組織化学および酵素組織化学による電顕解析の結果、MAb213陽性嗅神経終末には大型有芯顆粒large dense-cored vesicle(径100-150nm)が豊富に存在しているおり、AchE強陽性糸球体は典型的な一次嗅神経終末が進入していない異型糸球体であることが判明した。これらについて学会発表と論文発表を行った。現在なお、これら糸球体同士の関係をOlfactory Marker Protein(OMP)、hPAX-P2、NCAM、GAD、Calbindin28K、cGMP関連抗原等の免疫組織化学により、比較解析中である。

昨年度の研究結果として、Mab213抗体陽性嗅覚系もラット一次嗅覚系においてネックレス型嗅覚系を形成し、酵素組織化学的染色によるアセチルコリンエステラーゼ(AchE)強陽性糸球体と隣接関係にあり、その陽性構造の嗅球内分布及び嗅上皮内分布も明らかにされた。これらの結果を踏まえ、本年度は、電顕解析により、Mab213陽性ネックレス型糸球体とAchE強陽性糸球体様構造の超微細構造を明らかにした。Wistar系雄ラットを4%パラホルムアルデハイド、0-1.0%グルタールアルデハイド、リン酸緩衝混合液で灌流固定し、ラット嗅球ならびに鼻腔(脱灰標本)の前頭断切片をビブラトームあるいはクライオスタットによる凍結切片を作成後、Mab213抗体を用いた免疫組織化学およびAchEの酵素組織化学に供し、光顕および電顕レベルで検索を行った。鼻腔粘膜においては、Mab213陽性嗅覚受容体細胞は主に鼻腔尾側端背側部、特に鼻甲介のT1周囲および鼻中隔に接した鼻腔天井部に分布しており、その他、散在性に分布する陽性細胞が他の鼻腔後端粘膜にも観察された。嗅球では、最尾側でMab213陽性糸球体が全周を囲むように数珠状にネックレスパターンを呈して分布していた。またこれらMab213陽性糸球体は常にAchE強陽性の糸球体に隣接して存在していた。ネックレス型糸球体はトルイジンブルー染色で他の典型的な糸球体と同様な暗調小結節を有し、AchE強陽性糸球体は、暗調結節を有しない異型糸球体であり、免疫組織化学および酵素組織化学による電顕解析の結果、MAb213陽性嗅神経終末には大型有芯顆粒large dense-cored vesicle(径100-150nm)が豊富に存在しているおり、AchE強陽性糸球体は典型的な一次嗅神経終末が進入していない異型糸球体であることが判明した。これらについて学会発表と論文発表を行った。現在なお、これら糸球体同士の関係をOlfactory Marker Protein(OMP)、hPAX-P2、NCAM、GAD、Calbindin28K、cGMP関連抗原等の免疫組織化学により、比較解析中である。