塩基除去修復に関わるヒトのエンドヌクレアーゼIIIホモローグの機能解析

本研究は、塩基除去修復機構の諸段階で酸化的DNA損傷ピリミジン塩基に特異的に作用する大腸菌エンドヌクレアーゼIIIの哺乳類ホモローグ(hNTHL1やmNhtl1)の酵素機能や生理機能等を究明することを目的として行い、次のような結果を得た。1.大腸菌でmNthl1のcDNAをGST融合タンパク質として発現させ、精製し、抗体を作成した。これにより、同抗体をプローブとして、マウス各種臓器における酵素の分布や、細胞オルガネラにおける局在を調べる事が可能になった。2.hNTH1の核移行に必要なシグナルをEGFPをレポーターとして解析し、N末端28〜36番のアミノ酸配列と46〜52番のアミノ酸配列が必要であることを見い出した。3.酸化的ストレスに対するhNTH1の発現誘導の有無を、タンパク質レベルで調べた。過酸化処理では、塩基除去修復の主要酵素であるAPEXにおいては誘導が見られたものの、hNTH1では有意な発現誘導は見られなかった。4.hNTHL1/mNhtl1は結節性硬化症原因遺伝子TSC2/Tsc2とhead-to-headの向きに隣接しているので、この遺伝子間領域をルシフェラーゼベクターに組み込み、両遺伝子方向にプロモータ活性で測定した。その結果わずか36bpの配列で両遺伝子方向に多雨するプロモータ活性があることを見い出した。さらにその配列中に転写因子Etsの結合部位があり、これにEts関連タンパク質が結合することにより、両遺伝子方向への転写が正に制御されていることを見い出した。

本研究は、塩基除去修復機構の諸段階で酸化的DNA損傷ピリミジン塩基に特異的に作用する大腸菌エンドヌクレアーゼIIIの哺乳類ホモローグ(hNTHL1やmNhtl1)の酵素機能や生理機能等を究明することを目的として行い、次のような結果を得た。1.大腸菌でmNthl1のcDNAをGST融合タンパク質として発現させ、精製し、抗体を作成した。これにより、同抗体をプローブとして、マウス各種臓器における酵素の分布や、細胞オルガネラにおける局在を調べる事が可能になった。2.hNTH1の核移行に必要なシグナルをEGFPをレポーターとして解析し、N末端28〜36番のアミノ酸配列と46〜52番のアミノ酸配列が必要であることを見い出した。3.酸化的ストレスに対するhNTH1の発現誘導の有無を、タンパク質レベルで調べた。過酸化処理では、塩基除去修復の主要酵素であるAPEXにおいては誘導が見られたものの、hNTH1では有意な発現誘導は見られなかった。4.hNTHL1/mNhtl1は結節性硬化症原因遺伝子TSC2/Tsc2とhead-to-headの向きに隣接しているので、この遺伝子間領域をルシフェラーゼベクターに組み込み、両遺伝子方向にプロモータ活性で測定した。その結果わずか36bpの配列で両遺伝子方向に多雨するプロモータ活性があることを見い出した。さらにその配列中に転写因子Etsの結合部位があり、これにEts関連タンパク質が結合することにより、両遺伝子方向への転写が正に制御されていることを見い出した。