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塩基除去修復に関わるヒトのエンドヌクレアーゼIIIホモローグの機能解析

人核酸内切酶III同源物参与碱基切除修复的功能分析

基本信息

批准号：
11146222
负责人：
池田正五
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Okayama University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、塩基除去修復機構の諸段階で酸化的DNA損傷ピリミジン塩基に特異的に作用する大腸菌エンドヌクレアーゼIIIの哺乳類ホモローグ(hNTHL1やmNhtl1)の酵素機能や生理機能等を究明することを目的として行い、次のような結果を得た。1.大腸菌でmNthl1のcDNAをGST融合タンパク質として発現させ、精製し、抗体を作成した。これにより、同抗体をプローブとして、マウス各種臓器における酵素の分布や、細胞オルガネラにおける局在を調べる事が可能になった。2.hNTH1の核移行に必要なシグナルをEGFPをレポーターとして解析し、N末端28〜36番のアミノ酸配列と46〜52番のアミノ酸配列が必要であることを見い出した。3.酸化的ストレスに対するhNTH1の発現誘導の有無を、タンパク質レベルで調べた。過酸化処理では、塩基除去修復の主要酵素であるAPEXにおいては誘導が見られたものの、hNTH1では有意な発現誘導は見られなかった。4.hNTHL1/mNhtl1は結節性硬化症原因遺伝子TSC2/Tsc2とhead-to-headの向きに隣接しているので、この遺伝子間領域をルシフェラーゼベクターに組み込み、両遺伝子方向にプロモータ活性で測定した。その結果わずか36bpの配列で両遺伝子方向に多雨するプロモータ活性があることを見い出した。さらにその配列中に転写因子Etsの結合部位があり、これにEts関連タンパク質が結合することにより、両遺伝子方向への転写が正に制御されていることを見い出した。

This study aims to investigate the function and physiological function of enzymes in E. coli E. coli 1. E. coli mNthl cDNA fusion protein was developed, purified, and antibody produced. The distribution of enzymes in various organs and the regulation of enzymes in cells are possible. 2. hNTH1 nuclear migration is necessary for the analysis of EGFP, N-terminal 28 ~ 36 amino acid alignment and 46 ~ 52 amino acid alignment 3. The presence or absence of hNTH1 in the presence of acidified protein is regulated by the presence or absence of hNTH1. The main enzyme of radical removal and repair is APEX, hNTH1, which is induced intentionally. 4. hNTHL1/mNhtl1 determines the activity of tuberous sclerosis causative gene TSC2/Tsc2, head-to-head and inter-gene domains. As a result, the 36bp sequence was mapped in the direction of the vector. The combination site of Ets in the array is different from that of Ets in the array.