Epigenetic study of influenza A virus RNA polymerase

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保存性が高く変異が起こりづらいインフルエンザウイルスのRNAポリメラーゼは新規の抗インフルエンザ薬創薬の良い標的と考えられる。このRNAポリメラーゼは3種のサブユニットPA, PB1, PB2で構成され、そのうちPAはエンドヌクレアーゼ活性により宿主mRNAから5’-capと十数塩基を切り取り、プライマーとして利用することでウイルスのmRNAが合成される。当研究室での成果により、PAの組換えタンパク質がヒトのアセチル化酵素PCAFとGCN5によってアセチル化され、エンドヌクレアーゼ活性が促進することを報告した。質量分析によりPAの19番目のリジン残基（K19）がアセチル化標的であることを示唆し、K19をグルタミン（K19Q）とアルギニン（K19R）に変異させたところアセチル化レベルが減少した。興味深いことに、アセチル化リジンを模倣するK19Q変異によりエンドヌクレアーゼ活性が高まり、K19アセチル化の重要性が示唆された。今回、さらに質量分析の結果を再検討したところ、新たにK104とK158もアセチル化修飾部位であることを見出した。そこで、本報告では、K104とK158を単独でグルタミンまたはアルギニンに変異させた組換えタンパク質、およびK19・K104・K158の2か所以上のリジンを組み合わせてアルギニンに変異させた組換えタンパク質を作成した。そして、そのうちK104RおよびK104Qの変異を有する組換えタンパク質を用いて、アセチル化レベルの変化を解析した。その結果、どちらの組換えタンパク質もアセチル化レベルの減弱が観察され、K104もアセチル化の標的であることを生化学的に明らかにした。今後は、残りの変異組換えタンパク質のアセチル化レベルとエンドヌクレアーゼ活性の変化を順に解析することを計画している。