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棘皮動物胚の形態形成におけるシグナル分子・受容体間相互作用とその遺伝子の発現解析

棘皮动物胚胎形态发生过程中信号分子与受体相互作用及其基因表达分析

基本信息

批准号：
11152101
负责人：
加藤秀生
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究計画期間中にウニ胚一次間充織細胞が胞胚植物極上皮から胞胚腔へと移入し、細胞移動活性を持っている間充織胞胚期において抗ヒトFAK抗体と結合するタンパク質にチロシンリン酸化が発生段階特異的に起きることを発見した。この現象は一次間充織細胞形成とその移動活動の獲得に関連していることが示唆されたので、胞胚から一次間充織細胞が移入してからその移動基壁として使われる細胞接着蛋白のパムリンを分離し、in vitro条件下で間充織細胞胚から分離した一次間充織細胞に加え、抗ヒトFAK抗体結合タンパク質でのチロシンリン酸化を観察した。その結果、生体内同様のチロシンリン酸化が生じ、パムリン処理時間を種々に取ってチロシンリン酸化が起きる動態を観察すると、生体内で一次間充織細胞が移動活性を持っている期間に相当する時間内でチロシンリン酸化の程度が増減することが判明した。細胞移動基壁であるパムリンが一次間充織細胞へ抗ヒトFAK抗体結合タンパク質はヒトのFAKとは分子構造的にかなり異なっていることから、その分子量を元にP62蛋白と命名した。次に、P62は免疫組織化学的分布から非受容体型チロシン蛋白キナーゼであることが推測されたので、このタイプのチロシン蛋白キナーゼ阻害剤で胚を処理すると一次間充織細胞の形成が不完全になり、それ以降の形態形成運動が可逆的に阻害された。さらに一次間充織細胞中のP62は異常に亢進したチロシンリン酸化を引き起こしていることが解明され、形態的観察と一致する所見を得た。パムリンと結合できる細胞膜にあるFR-1R蛋白は抗体を用いたcDNAライブラリーの検索と、その後のcDNA配列解析から細胞接着蛋白群として知られるイムノグロブリンスーパーファミリーに属する可能性を明らかにした。

During the study period, the primary mesenchymal cells of the embryo were transplanted into the embryo cavity of the plant polar epithelium, and the cell migration activity was maintained during the mesenchymal embryo stage. The anti-FAK antibody and the binding of the anti-FAK antibody to the cytoplasm were observed. This phenomenon is related to the acquisition of primary mesenchymal cell formation and migration activity. The embryo is separated from the primary mesenchymal cell migration into the mobile substrate. The cell adhesion protein is isolated from the primary mesenchymal cell in vitro. The anti-FAK antibody binds to the primary mesenchymal cell. The results showed that the activity of primary mesenchymal cells in vivo was increased during the period of time during which the activity of primary mesenchymal cells in vivo was maintained. The cell mobility matrix is composed of primary mesenchymal cells, anti-FAK antibody binding proteins, and molecular weight proteins. In addition, the distribution of P62 immunohistochemical staining was predicted to be non-receptor-type, non-receptor-type and non-receptor-type. P62 in primary mesenchymal cells is abnormally stimulated, and the changes in its morphology are observed. FR-1R protein binding to cell membrane antibody in the use of cDNA sequence analysis, subsequent cDNA sequence analysis, cell adhesion protein group to understand the use of cDNA sequence analysis to identify the possibility of belonging to the