Hsp70と基質蛋白質の相互作用における特異性の解析

Hsp70 与底物蛋白相互作用的特异性分析

• 批准号: 11153226
• 负责人: 吉川 博文
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11153226/
• 关键词: 分子シャペロン; Hsp70; DnaK; DnaJ; シアノバクテリア

(1)DnaK-DnaJの相互作用に関してSynechocystis sp. PCC6803株の3つのDnaKおよび4つのDnaJを用いて、酵母2ハイブリッドシステムによる相互作用の検定を行った。3種のDnaK baitおよび4種のDnaJ preyを作製し検定したところ、DnaK1をBaitにしたときは、それ白身のみで転写活性を示してしまい比較が出来なかったが、これ以外のすべての組み合わせのうち、DnaK3とDnaJ3のペアが際だって高い活性を示した。したがってDnaKとDnaJの共同作業にはパートナーシップの特異性があることが示唆された。一方、DnaJにはDnaKと相互作用するといわれているJドメイン中の保存配列HPDがあるが、この配列に変異を導入したものは活性が落ちていた。(2)DnaKの基質認識における特異性に関してPCR変異法を用いてDnaK3の基質認識ドメインに変異処理を行い、宿主に戻すことによって温度感受性になった株を得た。このうちいくつかの株において変異点を同定したが、その多くが基質を取り囲むように並ぶβシート構造の中に落ちていた。温度感受性変異株の一つL436S株から得られたサプレッサー変異については、クローニングの結果、50SリボゾームのL24サブユニットにマップされ、その変異は6アミノ酸の重複によるものであった。L24はリボゾームのアセンブリーに関与するサブユニットといわれており、リボゾームのアセンブリーにDnaKが関与している可能性もある。パートナーであるDnaJからも遺伝的解析をおこない、温度感受性変異株を単離した。これらの変異点はいずれもJドメイン内に落ちていた。

(1)DnaK-DnaJ interaction related to Synechocystis sp. PCC6803 strain 3-DnaK and 4-DnaJ interaction related to yeast 2-DnaK. Three kinds of DnaK bait and four kinds of DnaJ prey are used for preparation, and the activity of DnaK1 and DnaJ 3 is higher than that of DnaK 1 and DnaJ 3. DNAK and DNAJ work together to create a unique environment. A party, DnaJ, DnaK, DnaK (2)DnaK substrate recognition is specifically related to PCR amplification. DnaK3 substrate recognition is related to PCR amplification. In this case, the difference between the two is the same, and the difference between the two is different. Temperature sensitivity of different strains L436S strain, 50S strain, L24 strain, 50S strain, 50S strain L24: Possibility of opening and closing the door to the right of access and closing the door to the right of access The analysis of temperature sensitivity and temperature sensitivity of different plants The difference between the two is that they are not in the same position.

项目成果

Hibino. T. 他: "Molecular characterization of DnaK from the halotolerant cyanobacterium Aphanothece halophytica for ATPase, protein floding and copper binding under various salinity conditions"Plant Mol. Biol.. 40. 409-418 (1999)

Hibino. T. 等人：“来自耐盐蓝细菌 Aphanothece halophytica 的 DnaK 在各种盐度条件下的 ATP 酶、蛋白质漂浮和铜结合的分子特征” Plant Mol. 40. 409-418 (1999)

Nakano M. 他: "A mutation in the 3-phsphoglycerate kinase gene allows anaerobic growth of Bacillus subtilis in the absence of ResE kinase"J. Bacteriol.. 181. 7087-7097 (1999)

Nakano M. 等人：“3-磷酸甘油酸激酶基因的突变允许枯草芽孢杆菌在没有 ResE 激酶的情况下厌氧生长”J. Bacteriol.. 181. 7087-7097 (1999)