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ラン藻のおけるマルチジーンファミリーを利用したDnak,DnaJの特異的相互作用

使用蓝藻中多基因家族的 Dnak 和 DnaJ 的特异性相互作用

基本信息

批准号：
10172230
负责人：
吉川博文
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10172230/
关键词：
シアノバクテリア分子シャペロン HSP70 Dnak DnaJ

项目摘要

シアノバクテリアSynechococcus sp.PCC7942株の3つのDnaKおよびDnaJ、ならびに大腸菌のDnaK.DnaJの各蛋白質を精製した。シアノバクテリアのDnaK3およびDnaJは他の蛋白質に比べて可溶性が低く、高濃度標品は得られなかったが、これらを用いて、DnaK ATPase活性のDnaJによる促進効果、および分析用超遠心を用いた沈降平衡法によるDnaKとDnaJの相互作用解析を行った。これらの結果では、DnaKとDnaJのすべての組み合わせで活性が測定できたが、組み合わせによる特異性、すなわちある特定の組み合わせの時が特に高い活性を持つということは観察されず、特異性の発揮にはシャペロンだけでなく基質を加えた系での検定が必要と考えられた。次に相互作用の検定を行うために遺伝的手法を用いた。PCR変異法を用いてdnaK3の基質認識領域およびdnaJ領域に変異処理を行い、宿主に戻すことによって温度感受性になった株を得た。このうちいくつかの株において変異点を同定したが、DnaK3に関してはその多くが基質を取り囲むように並ぶβシート構造の中に落ちていた。この点は大腸菌蛋白質で最近同定された変異点がβシート間のループ中に落ちているのに対して特徴的であった。一方DnaJに関しては、すべてJドメインと呼ばれるDnaKとの相互作用に必要といわれている領域内に落ちていた。また、DnaK3がチラコイド膜に多く局在していることから、変異林における光合成活性を酸素電極によって測定した。その結果、dnaK3変異林は野生林に比べて明らかに、温度シフト後の光合成能が低下していた。dnaK3変異株からはサプレッサー変異株が得られ、dnaK3分子内やdnaJの変異でないことを確認した。

DnaK and DnaJ of strain PCC7942, DnaK and DnaJ of Escherichia coli were purified. DnaK3 and DnaJ were used to analyze the interaction between DnaK and DnaJ by ultra-telecentric sedimentation equilibrium method. The results of this study are as follows: 1. The activity of DNAK and DNAJ is determined by the combination of DNAK and DNAJ. 2. The specificity of DNAK and DNAJ is determined by the combination of DNAK and DNAJ. 3. The activity of DNAK and DNAJ is determined by the combination of DNAK and DNAJ. 4. The activity of DNAK and DNAJ is determined by the combination of DNAK and DNAJ. The second interaction is determined by the method of transmission. PCR is used to identify the domain of DNA and DNA. In this case, the structure of the structure is different from that of the structure of the structure. The protein of E. coli is closely related to the protein of E. coli. The protein of E. coli is closely related to the protein of E. coli. The interaction between DNAJ and DNAK is necessary in the domain of DNAJ. DNAK3 is a new type of photosynthetic electrode. As a result, the photosynthetic energy of different forests is lower than that of wild forests. dnaK3 heterosis is confirmed by dnaK3 intramolecular heterosis