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神経変性疾患に関わる内在性脂質アルデヒドに関する基盤的研究

内源性脂醛参与神经退行性疾病的基础研究

基本信息

批准号：
11157211
负责人：
内田浩二
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11157211/
关键词：
神経変性疾患酸化ストレス脂質過酸化反応アルデヒド

项目摘要

脂質由来の揮発性アルデヒドであり、遺伝毒性および変異原性などの生理活性が明らかにされているアクロレインについてタンパク質との反応を生理的条件下にて行い、アミノ酸分析装置(現有設備)などを用い修飾アミノ酸の特定を試みた。その結果、アクロレインとリジン誘導体との反応により生成される付加体について600MHz核磁気共鳴装置(NMR)および高速液体クロマトグラフィー-質量分析装置(LC-MS)などを用いた化学構造解析を行い、新規付加体としてFDP-lysineを同定した。さらに、FDP-lysineの化学構造解析をうけ、ポストラベル法などによる微量検出法について検討した結果、アミノ酸分析による蛋白質酸加水分解系における高感度検出を可能にした。一方、キャリアタンパク質としてkeyhole limpet hemocyaninを用い、構造の明らかになったFDP-lysineとのconjugateを作製し、付加体をハプテンとした抗ハプテンモノクローナル抗体の作製を行った。ハプテン-タンパク質結合体を免疫原としてマウスに免疫し、定法通りミエローマ細胞とマウス脾細胞の細胞融合からハイブリドーマを作製し、モノクローナル抗体産生細胞株を樹立し、モノクローナル抗体5F6を得た。本モノクローナル抗体を用いた免疫組織染色により、少なくともアルツハイマー病患者脳組織におけるFDP-lysineの存在が確認された。

The origin of lipid, its volatility, toxicity, heterogenicity, physiological activity, biological activity, etc. can be determined under physiological conditions. Acid analysis equipment (existing equipment) can be used to modify the specific acid test. The results show that the chemical structure of the new additive is determined by 600MHz nuclear magnetic resonance (NMR) and high speed liquid crystal mass spectrometry (LC-MS). In addition, chemical structure analysis of FDP-lysine, microanalysis, acid analysis, protein acid hydrolysis system, and high sensitivity detection are possible. A side, a side, a The immunogen of the antibody conjugate was established and the antibody 5F6 was obtained by cell fusion of spleen cells and spleen cells. The presence of FDP-lysine in the tissues of patients with the disease was confirmed by immunostaining with the antibody.