転写不活性因子-クロマチンの相互作用ネットワークの構造基盤

转录失活子-染色质相互作用网络的结构基础

• 批准号: 11160218
• 负责人: 神藤 平三郎
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11160218/
• 关键词: 転写抑制機構; クロマチン; Rme1p; Ume6p; Zm-finger; DNA結合タンパク質; 構造

(1)Rme1pの機能構造解析 :3つのZn-finger motifをもつRme1pは、DNAとの結合に16残基からなるC末端領域(CRT)が必須であることは既に示したが、点変異体を用いた実験によりアミノ酸レベルでも、このことを実証することができた。さらに、これらの変異体がin vivoにおいて転写抑制機能を失うことを示した。このDNA結合ドメインは難溶性であるため、その改善に努め、種々の欠失変異体を作製しそれらの溶解性を確かめている。比較的溶解性のある300a.a.からなる全長のRme1pの結晶化も試みているが、成功には至っていない。(2)Rme1pとUme6pによる転写抑制機構 :Rme1pとUme6pは、それぞれ酵母の減数分裂を開始する遺伝子IME1およびIME2のrepressorである。前者の転写抑制機構についてはすでに明らかにした。後者の転写抑制について、Rme1p抑制系の解析に用いた方法を用いて、人工的に作成したHOP1とlacZ融合遺伝子の発現に対するUmelp-Rpd3p/Sin4p系による転写抑制を調べた結果、Ume6pによるIME2の発現の抑制はRpd3pによる脱アセチル化の機構のみからは解釈できず、新たに活性化因子の結合阻害による機構も考慮する必要がある、という結果を得た。(3)大腸菌由来のYhh蛋自質の構造構造解析 :原核細胞に普遍的に存在すgeneral repressor H-NSのDNA結合ドメインの構造およびDNAとの相互作用については既に報告した。Yhh蛋白質はH-NSの欠失変異体株において誘導発現される小蛋白質(88 a.a.)として発見されたが、その詳細な機能についてはまだ明らかではない。この蛋白質のNMRによる構造解析はすでに終了した。この蛋白質の構造は、主鎖の重原子に対してr.m.s.d. 0.16Aの高い精度で決定し、4本のβ鎖と2本のα-helixからなるα/β sandwich構造をとることが分かった。

(1) Rme1p machine analysis: 3. The combination of Zn-finger motif and 16 residues requires that the C-terminal domain (CRT) must be displayed, and that the computer system should be used to analyze and analyze the data. The writing suppressor can fail to display the in vivo write suppressor. In combination with DNA, the results show that the solubility is high, the solubility is high, and the solubility is very high. The solubility of 300a.a. The full length of the Rme1p results show that you are successful and successful. (2) Rme1p Ume6p restriction writing inhibition mechanism: Rme1p Ume6p, yeast mitosis start to IME1, IME2 repressor inhibition. In the former, the suppression mechanism is required to make sure that the information is clear. After that, the writing suppression, the Rme1p suppression, and the analysis of the Rme1p suppression system were performed by using the method, the artificial method, the HOP1 fusion system, the Umelp-Rpd3p/Sin4p system, the Umelp-Rpd3p/Sin4p system, the IME2 system, the Rpd3p system, the computer, the computer. The new activation factor combined with the inhibition mechanism was tested to determine the necessary conditions and the results of the test were satisfactory. (3) Analysis of the origin of Yhh eggs: the common existence of general repressor H-NS cells in prokaryotic cells is the interaction between DNA cells and DNA cells. The expression of Yhh protein (88 a. A.) was induced by Yhh protein (88 a.) If you don't want to hear about it, you will be able to tell the truth about it. Protein, NMR, protein, protein and protein. The protein was made and the heavy atom was added to the r.m.s.d. 0.16A high precision decision, 4 beta, 2 alpha-helix, alpha

项目成果

M. Shimizu ら: "A role of the C-terminal region adjacent to the zinc-fingers in tne DNA binding ability of Rmelp, a regulorof meiosis in S. cerevisiae"Necl. Acids Symp. Ser.. 42. 2019-2020 (1999)

M. Shimizu 等人：“邻近锌指的 C 末端区域在酿酒酵母减数分裂调节因子 Rmelp 的 DNA 结合能力中的作用”Necl Acids Symp. 42。 2020（1999）

H.Torigoeら: "Triplex formation of chemically modified oligonucleotides:Thermodynamic and kinetic studies"Biochemistry. 38. 14653-14659 (1999)

H. Torigoe 等人：“化学修饰寡核苷酸的三链体形成：热力学和动力学研究”生物化学 38. 14653-14659 (1999)

H. Shindo ら: "Identification of the DNA binding surface of H-NS protein from Escherichia coli by heteronuclear NMR spectroscopy"FEBS Letts.. 445. 63-69 (1999)

H. Shindo 等人：“通过异核 NMR 光谱鉴定来自大肠杆菌的 H-NS 蛋白的 DNA 结合表面”FEBS Letts.. 445. 63-69 (1999)

R. Nagane ら: "How Amino Acids Control the Binding of Cu(II) Ions to DNA(III)"J. Inorgan. Biochem.. (in press). (2000)

R. Nagane 等人：“氨基酸如何控制 Cu(II) 离子与 DNA(III) 的结合”J. Inorgan。（出版中）。