衝撃波による細胞内遺伝子導入法の開発

利用冲击波开发细胞内基因转移方法

• 批准号: 11877273
• 负责人: 庵谷 尚正
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877273/
• 关键词: 衝撃波; 遺伝子導入; B-Galactosidase

目的:水中で発生させた衝撃波を細胞浮遊液集束し照射すると、細胞表面に微小な小孔を短時間生じさせることをこれまで報告してきた。この現象を用い、ヒト細胞内に遺伝子を導入する事を本課題の目的とした。方法:衝撃波源は球殻状のピエゾ素子を用い、水槽内で底面が平坦な薄いポリエチレンフィルムの試験管内に浮遊癌細胞を入れて衝撃波を照射した。水槽内には脱気水を満たし、焦点部に試験管底部を置いた。焦点部における焦点強度は16〜20MPaで、毎秒5回、2000〜4000回の衝撃波を照射した。癌細胞としては主にヒト胃癌細胞(GCIY)を用い、浮遊液中に混じる遺伝子ベクター及びアッセイ系としてβ-galactosidase reporter gene system(LacZ gene)とGFP(green fluoroscein protein)reporter assay systemの2つの方法で検討した。結果:衝撃波を照射しないコントロールでは、2つの方法すなわちβ-galactosidase活性および蛍光のいずれも認められなかったが、衝撃波を照射すると、2〜5%の細胞にこれらの遺伝子の発現が認められた。今後の展望:今回の導入効率は高いとは言えないが、衝撃波により遺伝子導入が起こることが明らかになった。本法は非侵襲的で、時間的、空間的な制御性に優れているので、今後、微少気泡発生剤等を用いて効率の増強法について検討したい。

Purpose: the water で 発 raw さ せ た blunt shock wave を cells floating liquid cluster し irradiation す る と, cell surface tiny な に holes を short raw じ さ せ る こ と を こ れ ま で report し て き た. Phenomenon of こ の is を い, ヒ ト intracellular に heritage 伝 son を import す を る things this topic の purpose と し た. Methods: blunt shock waves は ball shell の ピ エ ゾ element child を い, sink within で thin flat bottom が な い ポ リ エ チ レ ン フ ィ ル ム の test tube に phytoplankton cells を into れ を て blunt shock wave exposure し た. The water tank is filled with に に degassing water を filled with た, and the bottom of the に test tube at the focal point is を placed at を た. The focal area における focal intensity <e:1> 16-20MPaで, 5 times per second, 2000-4000 times of impact waves を irradiation <s:1> た. Cancer cells と し て は main に ヒ ト gastric cancer cells (GCIY) を い, floating in the liquid に mixed じ る heritage 伝 son ベ ク タ ー and び ア ッ セ イ department と し て beta - galactosidase reporter gene system (LacZ gene) と GFP (green fluoroscein The protein)reporter assay system <s:1> 2 た <s:1> method で検 to obtain た た. Results: blunt shock wave を irradiation し な い コ ン ト ロ ー ル で は, 2 つ の way す な わ ち beta - galactosidase activity お よ び 蛍 light の い ず れ も recognize め ら れ な か っ た が を, strong shock wave exposure す る と の cells, 2 ~ 5% に こ れ ら の heritage 伝 son の 発 が now recognize め ら れ た. の future: now back の import high rate of unseen は い と は said え な い が, strong shock wave に よ り heritage 伝 son import が up こ る こ と が Ming ら か に な っ た. This law は noninvasive で, time, space, royal sex に な system optimal れ て い る の で, in the future, a small 気 bubble 発 tonic い を in raw て の raised strong working rate method に つ い て beg し 検 た い.