酵母を用いた中枢神経系における転写因子新遺伝子クローニングシステムの開発

使用酵母开发中枢神经系统转录因子的新基因克隆系统

• 批准号: 11877230
• 负责人: 多田 光宏
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877230/
• 关键词: Yeast-based Genetic Diagnosis; Cloning of New Genes; Transcriptional Factor; Luciferase Assay; ADE2 gene; Central Nervous System; Cloning of new Genes

本研究計画では、酵母(S.cerevisiae)内にて、広く哺乳動物の転写因子活性化能の定量を可能とするシステム(yeast-based luciferase assay;以下YLAと略)の構築を目的とする。それにより、転写因子の制御因子を単一あるいは複数個同時発現して制御システムを酵母内に再構築して検討を可能とする。本年度は以下の成果を得た.1)p53 responsive element(p21,Bax)を含むプロモータ駆動をFirefly luciferaseをリポーターとして測定するシステムを完成,Renilla luciferase(内部標準)とともにp53,p73,p63によるプロモーター活性化の測定に成功した.2)p53の変異体80種の転写活性化能を測定し,変異体は必ずしも全ての転写活性を失っているわけではないことを見いだした(投稿準備中).3)p53に相互作用し,転写活性を上昇させるc-Abl,p33ING1,ING2を同時導入し,それらによる転写活性の上昇を確認した.4)Tcf-4/β-cateninの転写活性を測定するアッセイも同様に確立し,APCを同時導入して転写活性が抑制されることを確認した(投稿準備中).さらに本年度中にp53,p73,p63遺伝子またはTcf-4/β-cateninとともにcDNA libraryをADE2またはFirefly luciferaseのリポーター酵母株に導入し,これらの転写活性を調節する新しい遺伝子のクローニングをモデル実験として行う予定である.

The aim of this study was to construct a yeast-based lipase assay (YLA) for quantifying the activity of transcription factors in S.cerevisiae and mammals. A number of simultaneous occurrences of control factors in yeast are possible. This year, the following results were obtained: 1) the p53 responsive element(p21,Bax) including Firefly luciferase was successfully determined; 2) 80 kinds of p53 responsive element were successfully determined; 3)p53 interaction, increase in writing activity, simultaneous introduction of c-Abl,p33 ING1, ING2, and confirmation of increase in writing activity, 4) determination of Tcf-4/β-catenin writing activity, APC simultaneous introduction of the activity of the suppression of this issue is confirmed. In the middle of this year, p53,p73,p63 genes were introduced into the yeast strain Tcf-4/β-catenin and ADE2, and the activity of the gene was regulated.

项目成果

Tada M, Furuuchi K, et al.: "Inactivate the Remaining p53 Allele or the Alternate p73? -Preferential selection of the Arg 72 polymorphism in cancers with recessive p53 mutants but not transdominant mutants."Carcinogenesis. (in press). (2001)

Tada M、Furuuchi K 等人：“使剩余 p53 等位基因或替代 p73 失活？ - 在具有隐性 p53 突变体但不具有跨显性突变体的癌症中优先选择 Arg 72 多态性。”致癌作用。

Marutani, M.,Tada, M., et al.: "Dominant-negative mutations of the tumor suppressor p53 relating to early onset of glioblastoma multiforme"Cancer Research. 59. 4765-4769 (1999)

Marutani, M.、Tada, M. 等人：“与多形性胶质母细胞瘤早期发病相关的肿瘤抑制因子 p53 的显性阴性突变”癌症研究。

Zhang C-L, Tada M, et al.: "Detection of PTEN nonsense mutation and psiPTEN expression in central nervous system high-grade astrocytic tumors by a yeast-based stop codon assay."Oncogene. 19. 4346-4353 (2000)

张 C-L、Tada M 等人：“通过基于酵母的终止密码子测定检测中枢神经系统高级星形细胞肿瘤中的 PTEN 无义突变和 psiPTEN 表达。”癌基因。

Asaoka, K.,Tada, M., et al.: "Efficient adenoviral gene delivery in malignant glioma cells depends on the expression levels of coxsackievirus and adenovirus receptor"Journal of Neurosurgery (in press). 未定(in press). (2000)

Asaoka, K., Tada, M.等人：“恶性神经胶质瘤细胞中腺病毒基因的有效传递取决于柯萨奇病毒和腺病毒受体的表达水平”《神经外科杂志》（待定）（待定）。 (2000)

Nozaki, M.,Tada, M. et al.: "Roles of the functional loss of p53 and other genes in astrocytoma tumorigenesis and progression"Neuro-Oncology. 1. 149-162 (1999)

Nozaki, M., Tada, M. 等人：“p53 和其他基因功能丧失在星形细胞瘤发生和进展中的作用”神经肿瘤学。