权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

軟骨組織における可溶性Wntレセプター(FRZB)の生理的役割の解明

阐明可溶性 Wnt 受体 (FRZB) 在软骨组织中的生理作用

基本信息

批准号：
11877317
负责人：
岩本容泰
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877317/
关键词：
軟骨形成 wnt 内軟骨性骨化 Frzb 血管新生 Wnt FRZB 石灰化

项目摘要

本年度は、(1)軟骨組織におけるWnt遺伝子の発現分布の検討検討、(2)WntおよびFrzbタンパク標品の作成、(3)血管新生に及ぼすFrzbの影響を検討した。(1)in situ hybridization法による検索で、ニワトリ胚の肢芽の軟骨原基周辺にWnt4およびwnt5bの発現が検出された。また、RT-PCR法では、wnt3、wnt8ならびにwnt11のはつげんが検出された。特に、wnt8は、Frzbに結合することが知られており、軟骨細胞の最終分化を促進する役目を担う可能性がある。一方Frzbは、軟骨形成初期には軟骨原基全域で発現していたが、成長軟骨細胞の最終分化にともない発現が減少した。(2)WntおよびFrzbをウイルスベクターに組み込み、線維芽細胞にtransfectionし、タンパクを発現させた。培養上清を回収し、上清中のWntおよびFrzbをキレートセファロースカラムにより精製を試みた。しかしながら、タンパクの収量が極めて悪く、生理活性の検討には至らなかった。細胞あたりの発現量をいかに増やすか、また、ともに等電点が8.5-9という塩基性の強いタンパクであるため精製過程の非特異的な吸着をいかに防ぐかが今後の問題である。(3)精製したFrzbおよびWntが利用できなかったのでウイルスベクターを用いて、Frzbの血管新生に及ぼす影響を予備的に検討した。ニワトリ肢芽組織にFrzbを過剰発現させたところ、同部の軟骨組織では完全に血管誘導が起こらず、また、内軟骨性骨化も阻害された。ただし、軟骨周囲組織では、血管網の形成は認められたので、軟骨組織中の血管誘導阻害因子は、Frzb以外にも複数存在する可能性がある。また、Frzbの毛細血管内皮細胞に対する直接作用についても今後検討する必要がある。

This year,(1) a review of the distribution of Wnt gene expression in cartilage tissue,(2) the preparation of Wnt and Frzb markers, and (3) a review of angiogenesis and the effects of Frzb were conducted. (1)in Situ hybridization method is used to detect the development of Wnt4 and Wnt5b in the cartilage primordium of embryonic limb buds. The RT-PCR method is used to detect the presence of Wnt3, Wnt8 and Wnt11. Special, wnt8, Frzb binding, knowledge, and promotion of chondrocyte final differentiation The development of cartilage primordia in the early stage of cartilage formation and the final differentiation of growing chondrocytes are reduced. (2)Wnt and Frzb can be found in the cell transfection and development process. Culture supernatant recovery, supernatant Wnt and Frzb The amount of physiological activity is extremely high, and the amount of physiological activity is extremely high. The isoelectric point of the cell is 8.5-9. The non-specific adsorption of the purification process is a problem in the future. (3)To improve the quality of the product, we need to prepare for its use, angiogenesis and impact. The cartilage tissue of the same part of the body is completely inhibited by the formation of cartilage. It is possible that there are multiple vascular induction factors other than Frzb in cartilage tissue. The direct action of Frzb on capillary endothelial cells is necessary for future investigation.