上皮由来抗菌ペプチドの利用による歯周病原性細菌の感染予防にむけて

使用上皮源性抗菌肽预防牙周病原菌感染

• 批准号: 11877366
• 负责人: 高柴 正悟
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877366/
• 关键词: 歯周病; 抗菌ペプチド; 細菌感染制御; 上皮(細胞); 局所遺伝子導入; 唾液(腺)

ヒト上皮細胞の産生するヒト型ベータデフェンシン-2(HBD-2)には,サイトカインや細菌内毒素の刺激によってその産生が誘導される特徴があるので,感染頻度の高い口腔内において,HBD-2の感染予防治療への応用が期待される。本研究では,HBD-2の発現様態と転写制御因子を解明することを目的とした。歯周病罹患歯肉中にHBD-2のmRNA発現を検出し,そのcDNAをクローニングした。また,同歯肉を用いた組織免疫染色によって歯肉上皮顆粒層にHBD-2を検出した。この遺伝子をテトラサイクリンによって転写活性を制御することができる哺乳動物発現ベクターpTRE-Mycに挿入し,子宮頚部上皮癌細胞にin vitro遺伝子導入を行って,テトラサイクリンを添加することによってHBD-2遺伝子(hbd-2)の転写を制御した。そして,この細胞の溶解液中のHBD-2の産生をELISA法によって確認した。さらに,この細胞溶解液は大腸菌に対して抗菌活性を示すことがわかった。今後は,ラット等を用いたin vivoにおける遺伝子導入において,テトラサイクリンによる制御を試みる必要がある。一方,導入と発現の効率を向上させるために,海外の研究者の協力の下,ウイルス由来の新規発現ベクターにhbd-2を挿入している途中である。また,hbd-2プロモーターをクローニングし,β-ガラクトシダーゼをレポーター遺伝子として有しているpSEAPベクターに挿入した。これを子宮頚部上皮癌細胞に導入し,細菌内毒素刺激下での同細胞の産生するβ-ガラクトシダーゼ活性を測定することによって,hbd-2プロモーター領域中の転写制御領域を特定することを試みた。その結果,転写開始点から352bp上流領域に制御部位が存在することがわかった。今後は,この部に結合する転写制御因子を特定する必要がある。

The production of HBD-2 (HBD-2) by epithelial cells is characterized by high frequency of infection and induction of bacterial endotoxin stimulation. The prevention and treatment of HBD-2 infection is expected. In this study,HBD-2's behavior and control factors were analyzed. The expression of HBD-2 mRNA in dental pulp from patients with periodontal disease was detected and its cDNA was detected. In addition, HBD-2 was detected by immunostaining in the epithelial granular layer of dental pulp. The expression of HBD-2 gene (hbd-2) in human uterine epithelial carcinoma cells was inhibited by the introduction of vitro gene into mammalian cells. The production of HBD-2 in cell lysates was confirmed by ELISA. This cell lysate shows antibacterial activity against Escherichia coli. In the future, the use of such methods in vivo will be necessary for the introduction of genes. On the one hand, the efficiency of import and development has been improved, and with the cooperation of overseas researchers, the new regulation of import and development has been developed in the middle of the process. hbd-2 is the best choice for the future. In order to determine the activity of β-glucuronidase produced by introducing uterine epithelial cancer cells into the uterus under the stimulation of bacterial endotoxin, we try to determine the specific control domain in the field of hbd-2. As a result, the control position of the upstream domain of the 352bp is present at the start point of the writing. In the future, it is necessary to write a specific control factor in combination with the Ministry.