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シナプス形成・可塑性の分子機構の解明

阐明突触形成和可塑性的分子机制

基本信息

批准号：
11680659
负责人：
植田淳子
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2001
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11680659/
关键词：
神経突起伸長因子初代解離培養系除神経 coiled-coil caspase golgi体小胞体 COS-7細胞

项目摘要

坐骨神経を切断したニワトリ脚筋抽出液由来の神経突起伸長因子 neurocrescin、MDP77(muscle derived protein of molecular mass 77k)、MDP62について解析した。これらの大腸菌発現蛋白質は、いずれもニワトリ胚脊髄、終脳の初代解離培養系において、濃度依存的な突起伸長活性を示し、アミノ酸配列としては、シグナル配列がなく、親水性残基に富み、leucime zipperと広範なcoiled-coil構造を形成しうるという共通した特徴を有していた。NeurocrescinはCOS-7細胞で発現されると、分子内のDESD^<358↓>Fで切断された断片が培養上清中に検出でき、さらに、切断部位のアミノ酸変異とcaspase-3を用いたin vitro切断により、この切断はcaspase-3とは異なるcaspase様の酵素によることがわかった。Pulse/chase法による解析では、細胞内に取り込まれた放射活性のうち、28.7%が培養上清へ移行し、免疫組織化学解析では膜近傍に局在する事からも、細胞外へ分泌される可能性が認められた。MDP77は、golgi体とmembrane ruffling領域に局在し、細胞骨格系への関与が示唆された。MDP62は、小胞体に局在し、COS-7細胞におけるpulse/chase法による解析から13.9%が培養上清に移行していた。また、坐骨神経を切断して4日後のニワトリ下腿部脚筋と正常脚筋を用い、Suppression Subtractive Hybridization法を行った。得られた候補クロ-ンをNorthern blot法により検定し、その部位塩基配列を解析した結果、除神経後に顕著に発現量が増加する新規遺伝子を5クローン単離できた。

Analyze the neurocrescin, MDP77 (muscle protein derived of molecular mass 77k), and MDP62 from which the hamstring aspirate was extracted.これらの coliform protein は, いずれもニワトリ embryonic spine 髄, final 鄳の primary dissociation culture system において, concentration-dependent なProtrusion elongation activity を Show し, Amin acid ligation としては, シグナル ligation がなく, Hydrophilic residue に富み, leucime zipperと広风なcoiled-coil structureをformationしうるという通した特徴を有していた. Neurocrescin is used for COS-7 cell development and intramolecular DESD^<358↓>F cutting. In the culture supernatant of the された fragments, に検出でき, さらに, and the cut part of the acid 変isoとcaspase-3 いたin The caspase-3 caspase-3 caspase caspase is caspase-3 caspase in vitro. The Pulse/chase method is used for analysis, intracellular extraction of radioactivity, and 28.7% culture. Clear migration, immunohistochemistry, membrane proximal localization, extracellular secretion, possibility recognition, etc. MDP77 is related to the golgi body and membrane ruffling domain, and the cytoskeleton system is related to the structure. MDP62 and small cell bodies were localized, and COS-7 cells were analyzed using the pulse/chase method and 13.9% of the culture supernatant was transferred.また, ischial nerve cutting off 4 days later, lower leg hamstrings and normal hamstrings are used, Suppression Subtractive Hybridization method is used.られたsubstitute クロ-ンをNorthern The results of the blot method and the analysis of the base arrangement of the parts are as follows: