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アポリポタンパク質による細胞内コレステロール搬出機構の解析

载脂蛋白细胞内胆固醇输出机制分析

基本信息

批准号：
00J02027
负责人：
山内祥生
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J02027/
关键词：
コレステロール HDL アポリポタンパク質 ABC transporter protein kinase C リン酸化

项目摘要

本研究はアポリポタンパク質によるHDL新生メカニズムをシグナル伝達系の面から解析し、この機序の分子的基礎を築くことを目的としている。今年度の研究により以下の結果が得られた。1.ヒトの線維芽細胞株WI-38において、apoA-IはABCA1のタンパク質レベルを上昇させたが、ABCA1のmRNAレベルは上昇させなかった。タンパク質合成を阻害してもapoA-IはABCA1のタンパク質レベルを上昇させたほか、ABCA1をRI標識してその分解を観察した結果、apoA-Iはその分解を抑制した。したがって、apoA-IはABCA1の分解を抑制し、その安定化を引き起こすことが明らかとなった。2.apoA-Iと同様、カルパイン阻害剤はABCA1の分解を抑制した。3.Protein kinase C (PKC)阻害剤はapoA-IによるABCA1の安定化を抑制し、apoA-I依存的な脂質の放出も抑制した。一方、PKC活性化剤はABCA1のタンパク質レベルを上昇させた。4.PC-PLCの阻害剤は、apoA-IによるABCA1の安定化とapoA-I依存的な脂質の放出を抑制した。5.WI-38にGFPを結合したPKCαを発現させ、その活性化を顕微鏡下で観察した。その結果、apoA-I刺激によってGFP-PKCαは細胞質から細胞膜などへ移動し、この移動はPKC阻害剤によって完全に抑制された。したがって、apoA-IがGFP-PKCαを活性化することが明らかになった。6.WI-38においてPKC活性化剤はABCA1のリン酸化を促進した。また、apoA-I刺激によってもABCA1のリン酸化は促進された。以上の結果より以下の結論を得た。apoA-Iは細胞と相互作用することでPC-PLCを介してPKCαを活性化し、この活性化によってABCA1の安定化とABCA1のリン酸化が誘導され、HDL新生反応が促進されることが示唆された。

The purpose of this study is to analyze the data of HDL freshmen and the molecular basis of the molecular sequence. The results of this year's study show that the following results are satisfactory. 1. The cell lines of WI-38, apoA-I, ABCA1, ABCA1, and ABCA1mRNAs were isolated from each other. The synthesis blocks the results of the apoA-I, ABCA1, and suppression tests, the RI tag decomposition results, and apoA-I decomposition suppression results. "apoA-I", "ABCA1" decompose "suppression", "stabilization" lead to the introduction of "suppression", "stabilization", "suppression" and "stabilization". 2.apoA-I disassemble, block, block, ABCA1 decompose, suppress. 3.Protein kinase C (PKC) blocks "apoA-I", "ABCA1" stabilization "inhibition", apoA-I-dependent "fat" release "inhibition". On the one hand, the PKC activates the ABCA1. 4.PC-PLC "block", apoA-I "ABCA1" stabilize "apoA-I-dependent fat" release "inhibition". 5.WI-38 GFP was combined with PKC α to observe the changes and the activation of the cells under the microscope. The results showed that apoA-I stimulated GFP-PKC α cell cycle, cell membrane membrane translocation, PKC blockage assay, and completely inhibited the cell cycle. ApoA-I, GFP-PKC α, activation, activation and activation. 6.WI-38, PKC activation, ABCA1 activation, acidizing promotion. ApoA-I stimulation, ABCA1 stimulation, acidification, acidification, stimulation, stimulation, acidification, acidification and acidification. The above results show that the following results are satisfactory. ApoA-I cell interaction induces activation of PKC α, activation of ABCA1, stabilization of ABCA1, acidification of acidifying agents, and induction of HDL reactionaries.