骨芽細胞分化増殖制御に関わる分子群の同定・機能解析と硬組織再生へのアプローチ

参与控制成骨细胞分化和增殖的分子群的鉴定和功能分析以及硬组织再生的方法

• 批准号: 00J04660
• 负责人: 船戸 紀子
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J04660/
• 关键词: 筋芽細胞; epicardin; Pod-1; capsulin; bHLH型転写因子; p21; WAF1; Cip1; muscle creatine kinase

我々は過去に、bHLH型転写因子がCREB-binding proteinと共に骨芽細胞の増殖停止および分化特異的な遺伝子の発現に共通に関わっていることを発表した。今回、bHLH型転写因子E2AタンパクのbHLHドメインに相互作用のある遺伝子を得るため、MG63細胞のcDNAライブラリーを作り、酵母two-hybrid法を行ったところ、35種類のクローンが得られ、約半数がbHLH型転写因子epicardin/Pod-1/capsulinであった。Epicardinは、鰓弓由来の筋芽細胞、腸、腎臓、脾臓、肺の間葉系細胞に発現するが、その機能は明らかにされていなかった。そのため我々は、酵母two-hybrid法、Mammalian two-hybrid法、Immunostaining、Reporter assay、Chromatin immunoprecipitation (ChIP)により、epicardinの機能解析を行った。その結果、epicardinは、bHLH型転写因子E2AタンパクとbHLHドメインを介して相互作用し、核に共発現した。また、増殖停止を誘導するp21(WAF1/Cip1)および筋分化を誘導するMCK (muscle creatine kinase)遺伝子のpromoter活性はE2AとMyoD依存的に活性化されるが、epicardinはそれらの転写を負に制御していることを見いだした。さらにepicardinは、MCK promoterに結合し、C2C12筋芽細胞の最終分化を実際に抑制した。以上のことからepicardinは、細胞の増殖停止および分化特異的な遺伝子の発現に負の機能をもち、分化を抑制することが示唆された。酵母two-hybrid法で得られたその他の分子については、解析中である。

I 々 は past に factor, written by the bHLH type planning が after CREB - binding protein と に bone bud cells の raised total yield stop お よ び differentiation specific な but 伝 の 発 now common に に masato わ っ て い る こ と を 発 table し た. Today back to the bHLH type planning, write factor E2A タ ン パ ク の bHLH ド メ イ ン に interaction の あ る heritage 伝 sons を may る た め, MG63 cells の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を り, yeast two - line hybrid method を っ た と こ ろ, 35 species の ク ロ ー ン が must ら れ, about half of が bHLH type write factor epicar planning din/Pod-1/capsulinであった. Epicardin は の jin bud cells of the origins, branchial arch is crucial, intestine, kidney, splenic, pulmonary の mesenchymal cell に 発 now す る が, そ の function は Ming ら か に さ れ て い な か っ た. Youdaoplaceholder0 ため I 々 そ, yeast two-hybrid method, Mammalian two-hybrid method, Immunostaining, Reporter assay, Chromatin immunoprecipitation (ChIP)によ によ, epicardin <s:1> can parse を lines った. そ の results, epicardin は factor, written by the bHLH type planning E2A タ ン パ ク と bHLH ド メ イ ン を interface し て し interaction and nuclear に 発 now し た. Youdaoplaceholder0, proliferation cessation を induces するp21(WAF1/Cip1)および tendon differentiation を induces するMCK (muscle creatine) Kinase) posthumous son 伝 の promoter activity は E2A と MyoD dependent に activeness さ れ る が, epicardin は そ れ ら の planning write を negative に suppression し て い る こ と を see い だ し た. Youdaoplaceholder0 epicardin and MCK promoterに bind to <s:1> and C2C12 spore cells <s:1> eventually differentiate を interstitial に inhibit <s:1> た. Above の こ と か ら epicardin は, cells stop の raised colonization お よ び differentiation specific な but 伝 の 発 now に negative の function を も ち, differentiation を suppression す る こ と が in stopping さ れ た. The two-hybrid method of yeast で obtained られたそ <s:1> its <s:1> molecule に て て て て, in the analysis である.

项目成果

黒田敬之他, 船戸紀子を含む: "アトラス顎顔面矯正-顎変形症と口唇口蓋裂の矯正治療-"医歯薬出版株式会社. 201 (2002)

黑田纪之等人，包括船户纪子：“Atlas Maxillofacial Orthodontics - 下颌畸形和唇腭裂的正畸治疗”石药出版有限公司 201（2002）

Funato N, Ohyama K, Kuroda T, Nakamura M.: "Basic helix-loop-helix transcription factor epicardin/capsulin/Pod-1 suppresses differentiation by negative regulation of transcription"J. Biol. Chem.. (in press). (2003)

Funato N、Ohyama K、Kuroda T、Nakamura M.：“基本螺旋-环-螺旋转录因子 epicardin/capsulin/Pod-1 通过转录的负调控抑制分化”J.

Kanda T, Funato N, Baba Y, Kuroda T.: "Evidence for fibroblast growth factor receptors in myofibroblasts during palatal mucoperiosteal repair"Arch. Oral. Biol.. (in press). (2003)

Kanda T、Funato N、Baba Y、Kuroda T.：“腭粘骨膜修复期间肌成纤维细胞中成纤维细胞生长因子受体的证据”Arch。