軟骨細胞におけるbHLH型転写因子Handの機能解析

软骨细胞bHLH转录因子Hand的功能分析

基本信息

批准号：
21890072
负责人：
船戸紀子
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

bHLH型転写因子Hand1およびHand2は、骨格系の中では下顎となる第一鰓弓のみに発現しており、鰓弓での発現を制御するエンハンサーを欠損させたHand2^<BA/BA>マウスでは、メッケル軟骨の欠損を認める。しかし、Hand転写因子の軟骨発生における標的遺伝子、機能は不明である。本研究の目的は、軟骨細胞での(1)Hand転写因子と他のシグナル伝達系のクロストークの同定および機能解析、(2)Hand転写因子の標的遺伝子の探索、を通じて下顎における軟骨発生の機構および軟骨細胞分化メカニズムを解明することである。軟骨細胞におけるHand転写因子と他のシグナル伝達系とのクロストークを同定するために、酵母ツーハイブリッド法にて、Hand2およびTwist1をbaitとしてヒト軟骨細胞のcDNAライブラリーから陽性クローンの遺伝子を同定した。Hand2に対して特異的に相互作用する分子を抽出するために、Hand2と相同性の高いbHLH型転写因子Twist1をコントロールとし、以下の分子が同定された。Twist1と相互作用する分子:(1)組織全般に発現するbHLH型転写因子であるE2-2、(2)コアクチベーターLIMタンパク質。Hand2と相互作用する分子:(1)組織全般に発現するbHLH型転写因子であるE2-2、HEB、E12、(2)zinc-fingerモチーフを有する新規の転写因子、(3)ホメオドメイン結合領域を持つキナーゼ、(4)SUMOリガーゼ、ユビキチン結合酵素、等。現在、興味ある全ての分子について全長のクローニングを終え、機能解析を行っている。

BHLH-type转录因子Hand1和Hand2仅在Gill Arch中表达，该尺弓是骨架系统中下颌的较低，并且在Hand2^<ba/ba>小鼠中观察到梅克尔软骨中的缺陷，在增强子中控制gill Arch在Gill Arch表达中表达的小鼠缺陷。但是，手动转录因子在软骨发育中的靶基因和功能尚不清楚。这项研究的目的是通过（1）（1）鉴定和功能分析手部转录因子的串扰和（2）寻找手动转录因子的目标基因，以阐明下颌和软骨细胞分化机制中软骨发育的机制。为了鉴定软骨细胞中手动转录因子和其他信号系统之间的串扰，使用Hand2和Twist1作为诱饵，使用酵母两杂化方法从人的软骨细胞cDNA库中鉴定出阳性克隆基因。为了提取特异性与Hand2相互作用的分子，使用BHLH转录因子Twist1鉴定了以下分子，该分子与Hand2具有高同源性。与Twist1相互作用的分子：（1）E2-2，在组织中表达的BHLH型转录因子，以及（2）共激活因子LIM蛋白。 Molecules that interact with Hand2: (1) E2-2, HEB, E12, which are bHLH-type transcription factors that are expressed in tissues in general, (2) novel transcription factors with a zinc-finger motif, (3) kinases with homeodomain binding regions, (4) SUMO ligases, ubiquitin-conjugated enzymes, etc. Currently, full-length cloning for all molecules有趣的是完成并进行功能分析。