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アクチン線維形成の動的制御機構の解析

肌动蛋白原纤维形成的动态控制机制分析

基本信息

批准号：
00J06335
负责人：
岡田香子
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J06335/
关键词：
Aip1 コフィリンアクチン細胞骨格

项目摘要

Actin Interacting Protein 1(XAip1)は、two-hybrid systemによりアクチンと相互作用する因子として出芽酵母より見いだされた因子であり、真核生物に広く保持されているアクチン結合タンパク質である。そのXenopusホモログであるXAip1は、コフィリンの結合したアクチン線維に選択的に結合し、そのdisassemblyを促進する。また、その際にアクチン線維の重合端に結合し重合を阻害することをこれまでに報告してきた。そこで、XAip1がどのようにしてコフィリンとともにアクチン線維のdisassemblyを促進するのか、さらなる解析を行った。まず、組み替え体XAip1をバキュウロウイルスを用いた系で発現・精製し、内在性のXAip1と同様の活性を持つことを生化学的解析により確認した。アクチン線維のdisassemblyにはアクチン線維の断片化と、脱重合の2要素が考えられる。そこで、XAip1がコフィリンによるアクチンの脱重合を促進するかどうか、生化学的な解析を行った。まずあらかじめゲルゾリンを加えて重合させておいたアクチン線維にコフィリン・XAip1、更にゲルゾリン:アクチン複合体を重合端をブロックするために加えた後、Gcグロブリンを加えて脱重合を開始させた。その結果、XAip1の濃度を増加させたときに見られる脱重合の初速度の増加は、コフィリンのそれに比べ優位な差は認められなかった。すなわち、XAip1はコフィリンの脱重合活性を促進しないと考えられる。XAip1はコフィリンの共存下でアクチン線維の重合端をキャップすることをこれまでに報告したが、人工的に切断されたアクチン線維の末端もキャップすることが出来るか解析を行った。アクチン線維にコフィリン・XAip1を加えた後にピペッティングを行い、アクチン線維を切断したものを様々な時間インキュベートしてアクチン線維をannealingさせ、Gーアクチンを加えて重合初速度を測定した。その結果、コフィリン・XAip1両者を加えた実験群においては、いずれの時間点においても対照実験に比べ重合は抑制されており、重合端がキャップされていることが確認された。更にコフィリン非存在下におけるXAip1のアクチン結合能についてヌクレオチド依存性があるか解析を行った。あらかじめATPまたはADP存在下で重合させたアクチン線維にXAip1を加え、ピペッティングによりアクチン線維を切断した後様々な時間インキュベート後、遠心してアクチン線維を回収した。その結果、XAip1のアクチン線維への結合量には優位な差異は認められなかった。以上の結果より、XAip1単独でのアクチン結合能はヌクレオチド非依存的であり、また重合端のキャッピングはコフィリン存在下において顕著であること、またXAip1はコフィリンの脱重合活性に影響しないことを明らかにした。

Actin Interacting Protein 1(XAip1) is a two-hybrid system that interacts with budding yeasts and is maintained in eukaryotes. XAip1 is a hybrid of XAip1 and XAip1. XAip1 is a hybrid of XAip1 and XAip1. XAip1 is a hybrid of XAip1 and XAip1. In addition to the above, it is also necessary to report on the coincidence end of the line dimension. XAip1 and XAip1 are analyzed in detail. XAip1, a member of XAip1 group, was identified by biochemical analysis in the presence of XAip1, a member of XAip1 group, and a member of XAip1 group. The two elements of the line dimension disassembly are divided into two parts: fragmentation and decoupling. XAip1 is a new type of biochemical analyzer. In addition to the overlap, the overlap of the line dimension is increased. XAip1, XAip1 and XAip1 are increased. As a result, the concentration of XAip1 increased, and the initial velocity of declination increased. XAip1 is a non-linear, non-linear. XAip1: The blue shift of the line dimension is the end of the line dimension. It is the end of the line dimension. XAip1: After adding the dimension, select the dimension of the line, cut the dimension of the line, and determine the initial velocity of the coincidence. The result is that the number of times when a match is made is greater than that when a match is made. In addition, the non-existence of XAip1 can be resolved by binding with XAip1. In the presence of ATP, the line dimension XAip1 is added, the line dimension is cut off, and the time is returned. The results, XAip1, XAip1, XA The above results show that XAip1 can be used to bind to a single compound independently of each other. In the presence of XAip1, XAip1 can be used to bind to a single compound independently of each other.