ポジショナルクローニング法によるニジマス優性アルビノ遺伝子の単離に関する研究

定位克隆法分离虹鳟鱼显性白化基因的研究

• 批准号: 00J07552
• 负责人: 中村 佳代
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: 東京水産大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J07552/
• 关键词: 優性アルビノ; ニジマス; BAC; 染色体歩行; 連鎖解析

ニジマス優性アルビノ形質と連鎖するOmyD-AlbnTUFマーカー(5塩基の繰り返し配列を含み、AFLPマーカーからマイクロサテライトマーカーに変換したもの)を用いて、前年度作成したニジマスBACライブラリーのHDR(high density replica)フィルターをコロニーハイブリダイゼーションによってスクリーニングし、陽性と思われる12個のBACクローンを得た。このHDRフィルターにはBACクローン1つにつき1つのspotのみが配列してある(duplicateではない)ため、得られたクローンが真の陽性であるかをPCR及びサザンハイブリダイゼーションにより確認後、各BACクローンの両末端をシークエンスした。得られたシークエンスをもとに各BACクローンの両末端部分にプライマーを設計し、各BACクローンのDNAを鋳型にしてそれぞれPCRを行い、PCR産物の増幅の有無から12個のBACクローンの並びを決定することができた。この情報をもとに、BACライブラリーの部分contigを作製し、今後の研究展開への足場を確かなものにした。具体的には、整列化したクローンの中でOmyD-AlbnTUFマーカーから最も遠位にあるクローンの末端配列を次のスクリーニングにおけるプローブとし、新たにBACライブラリーをスクリーニングし、陽性クローンの整列化と連鎖解析による進行方向の決定による染色体歩行を行えば、優性アルビノ遺伝子座の特定や同遺伝子の単離ができるものと確信している。

ニ ジ マ ス prepotency ア ル ビ ノ character と chain す る OmyD - AlbnTUF マ ー カ ー (5 salt の Qiao り return し match column を み, markers マ ー カ ー か ら マ イ ク ロ サ テ ラ イ ト マ ー カ ー に variations in し た も の) を with い て, before the year is made し た ニ ジ マ ス BAC ラ イ ブ ラ リ ー の HDR (high Density up) フ ィ ル タ ー を コ ロ ニ ー ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン に よ っ て ス ク リ ー ニ ン グ し, positive と わ れ る 12 の BAC ク ロ ー ン を た. こ の HDR フ ィ ル タ ー に は BAC ク ロ ー ン 1 つ に つ き 1 つ の spot の み が match column し て あ る (duplicate で は な い) た め, ら れ た ク ロ ー ン が の really positive で あ る か を PCR and び サ ザ ン ハ イ ブ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン に よ り confirmed, the BAC ク ロ ー ン の struck end を シ ー ク エ ン Youdaoplaceholder0 た. Have to ら れ た シ ー ク エ ン ス を も と に the BAC ク ロ ー ン の struck the end part に プ ラ イ マ ー を し design, the BAC ク ロ ー ン の DNA を type where に し て そ れ ぞ れ PCR の を い, PCR products have rights の picture without か ら 12 の BAC ク ロ ー ン の and び を decided す る こ と が で き た. こ の intelligence を も と に, BAC ラ イ ブ ラ リ ー の part contig を as し, future research on へ の の foot field を か indeed な も の に し た. Specific に は, the whole column し た ク ロ ー ン の in で OmyD - AlbnTUF マ ー カ ー か ら most も far a に あ る ク ロ ー ン の ends with column を times の ス ク リ ー ニ ン グ に お け る プ ロ ー ブ と し, new た に BAC ラ イ ブ ラ リ ー を ス ク リ ー ニ ン グ し, positive ク ロ ー ン の whole column change と chain analytic に よ る の decided to direction に よ る chromosome step line を え ば, optimal ア ル ビ ノ heritage 伝 stroma の specific や with heritage 伝 son の 単 from が で き る も の と sure し て い る.

项目成果

O.Iitsuka, K.Nakamura, A.Ozaki, N.Okamoto, N.Saga: "Genetic information of three pure lines of Porphyra yezoensis (Bangiales, Rhodophyta) obtained by AFLP analysis"Fisheries Science. 68. 1113-1117 (2002)

O.Iitsuka、K.Nakamura、A.Ozaki、N.Okamoto、N.Saga：“通过 AFLP 分析获得的条斑紫菜（Bangiales、Rhodophyta）三个纯系的遗传信息”渔业科学。