光スイッチを用いた次世代型不妊魚作出法の開発

利用光开关开发下一代不育鱼生产方法

• 批准号: 21K19133
• 负责人: 林 誠
• 金额: $ 4.08万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-07-09 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19133/
• 关键词: 光スイッチ; ニジマス; CRISPR/Cas9; 魚類; 不妊魚

不妊化技術は養殖場から逃亡した個体による遺伝子汚染への対応策として、また、作出した優良系統のコピー防止策として、幅広い水産分野において注目されており、安定した簡便な不妊魚作出法の開発が期待されている。しかし、不妊化技術における大きな問題の一つは、不妊化した個体からは次世代を得ることができないことにある。そのため、ヘテロで系統を維持する必要があり、その交配で得られた次世代では1/4しか不妊にならないため、不妊魚の選抜を行う必要があるのが現状である。そこで、本研究では新たな不妊魚の大量生産技術として、光スイッチを利用したCRISPR/Cas9法の有用性を検討することを目標に研究を行う。これまで、光スイッチを利用したCRISPR/Cas9は、培養細胞をはじめマウスなどにおいて利用されている。しかし、魚類、特にニジマスなど低水温環境で飼育される魚類においても光スイッチを利用したCRISPR/Cas9を用いた報告はないのが現状である。そこで、ニジマスをモデルとして、光スイッチを利用したCRISPR/Cas9が利用可能かどうかを確かめることとした。そのために、光スイッチを利用したCRISPR/Cas9の作用を容易に判別できるように、体色遺伝子の一つである、slc45a2遺伝子に着目した。この遺伝子はメラニン合成に関わるため、その機能を破壊すると黒色素が欠損し、アルビノの表現型を示す。そこで、slc45a2に対するgRNAをを発現させるためにニジマスで利用できると思われるU6プロモーターを検討し、そのコンストラクトと、光反応性のCRISPR/Cas9を全身で発現させるコンストラクトをデザインした。

Non-pregnant technical breeding grounds do not have access to the safety and safety of fugitive animals, and their children are infected with health care policies, such as health care, prevention, safety, safety, safety and safety. The technical problems of non-pregnancy and non-pregnancy have been solved in the first place, and the next generation of non-pregnancy-free technology will be awarded to the next generation. Pregnancy, pregnancy and pregnancy. The purpose of this study is to develop a large number of technical research programs, which are based on the use of CRISPR/Cas9. Make full use of the CRISPR/Cas9, culture the cells, and make use of the cells. In the environment of low water temperature, it is very important to make use of the information on the use of low-temperature CRISPR/Cas9 reports on the use of low-temperature water environment. Make sure that you can use the CRISPR/Cas9 to make sure that you don't know what to do. By using the CRISPR/Cas9 effect, it is easy to distinguish the color of the body, the color of the body and the eyes of the slc45a2. The production of melanin, melanin and melanin. This is the first time that the whole body has been detected. Slc45a2, slc45a2, gRNA, and the whole body have been detected.