がん細胞の悪性化を阻害する物質の探索

寻找抑制癌细胞恶变的物质

• 批准号: 00J60902
• 负责人: 和田 俊一
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J60902/
• 关键词: TPU0015A; DLD-1; リボゾームS6サブユニット; caspase 3; p27; ERK; IkB; TPU2013

前年度に引き続き、糸状菌由来テルペノイドTPU0015Aのがん細胞足場非依存的増殖阻害作用機構の解析を行った。TPU0015Aにより処理を行った大腸がん由来DLD-1細胞における各種癌遺伝子およびアポトーシス関連遺伝子の発現量の変化、リン酸化状態の変化をウェスタンブロッティングにより解析した。前年度までに見られたリボゾームS6サブユニットのリン酸化の向上やcaspase 3の活性化に加え、TPU0015A処理細胞において、p27の発現量やERKのリン酸化の上昇およびIkBのリン酸化量の減少が見られた。また、抗リン酸化PKA基質抗体を用いたタンパク質リン酸化の検出パターンにもいくつかの変化が見られた。こうした解析に並行して、本年度は新たにTPU0015Aの直接的な標的となるタンパク質を同定するための実験を行った。本物質自体は、生産菌からの収量が限られるため、まず大量に化学合成することができ、活性を保持する類縁体を用意することとした。足場存在下の細胞への毒性も高まったものの、TPU2008、TPU2009、TPU2013などにTPU0015Aと類似した活性が見られた。このうちTPU2013を用いて以降の実験を行うこととした。本化合物群の構造中、側鎖部位が最も活性への関与が低いことが予想されたことから、この部位をビオチン化したTPU2013を用意した。DLD-1細胞抽出液中にビオチン化TPU2013を加え、ストレプトアビジン結合セファロースによって沈殿させる方法で、TPU2013結合タンパク質の探索を行ったところ、約45kDaおよび約60kDaのタンパク質の特異的な結合が見られた。

In the previous year, に cited 続 続 <e:1>, the origin of the filamentous bacteria テ テ ペノ ド ド, TPU0015A <s:1> がん the mechanism of non-dependent proliferation inhibition in the foot of がん cells に analysis を row った. Line TPU0015A に よ り 処 Richard を っ た e. が ん origin DLD clutches - 1 cell に お け る traces of various cancer 伝 son お よ び ア ポ ト ー シ ス masato even heritage 伝 son の 発 amount is の variations, リ ン acidification condition の variations change を ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ に よ り parsing し た. Before annual ま で に see ら れ た リ ボ ゾ ー ム S6 サ ブ ユ ニ ッ ト の リ ン acidification の upward や caspase 3 の activeness に え, TPU0015A 処 Richard cells に お い て, p27 の 発 now quantity や ERK の リ ン acidification の rise お よ び IkB の リ ン acidification decrease の が see ら れ た. ま た, resisting リ ン acidification PKA を matrix antibody with い た タ ン パ ク qualitative リ ン acidification の 検 out パ タ ー ン に も い く つ か の variations change が see ら れ た. Analytical に こ う し た parallel し て, this year's new た は に TPU0015A の direct な mark と な る タ ン パ ク qualitative を with fixed す る た め の be 験 を line っ た. This matter of autologous は, producing bacteria か ら の が 収 quantity limit ら れ る た め, ま ず large に chemical synthesis す る こ と が で き, active を keep す る class try body を intention す る こ と と し た. In the presence of the foot, <s:1> cells へ have high <s:1> toxicity <e:1> まった, TPU2008, TPU2009, TPU2013な <s:1> に, TPU0015Aと similar <s:1> た activities が can be found in られた. <s:1> うち うちTPU2013を uses て て to reduce <s:1> practice を う とと とと とと た た た た た た. This group of compounds の structure, side lock が も most active part of へ の masato and low が い こ と が to think さ れ た こ と か ら, こ の parts を ビ オ チ ン change し た TPU2013 を intention し た. DLD clutches - 1 cell extract に ビ オ チ ン change TPU2013 を え, ス ト レ プ ト ア ビ ジ ン combining セ フ ァ ロ ー ス に よ っ て Shen Dian さ せ る method で, TPU2013 タ ン パ ク mass line の explore を っ た と こ ろ, about 45 kda お よ about 60 kda び の タ ン パ ク qualitative の specific な combining が see ら れ た.

项目成果

Shun-ichi Wada, Masakazu Niimi, Kyoko Niimi, Ann R.Holmes, Brian C.Monk, Richard D.Cannon, Yoshimasa Uehara: "Candida glabrata ATP-binding cassette transporters Cdr1p and Pdh1p expressed in Saccharomyces cercvisiae strain deficient in membrane transporter

Shun-ichi Wada、Masakazu Niimi、Kyoko Niimi、Ann R.Holmes、Brian C.Monk、Richard D.Cannon、Yoshimasa Uehara：“光滑念珠菌 ATP 结合盒转运蛋白 Cdr1p 和 Pdh1p 在膜转运蛋白缺陷的酿酒酵母菌株中表达

Shun-ichi Wada, Sachi Sri Kantha, Takahiro Yamashita, Shigeki Matsunaga, Nobuhiro Fusetani, Shugo Watabe: "Accumulation of H^+ in vacuoles induced by a marine toxin, theonellamide F, in rat embryonic 3Y1 fibroblasts"Marine Biotechnology. 4. 571-582 (2002)

Shun-ichi Wada、Sachi Sri Kantha、Takahiro Yamashita、Shigeki Matsunaga、Nobuhiro Fusetani、Shugo Watabe：“在大鼠胚胎 3Y1 成纤维细胞中，海洋毒素 Theonellamide F 诱导的液泡中 H^ 的积累”海洋生物技术。