がん細胞の悪性化を阻害する物質の探索

寻找抑制癌细胞恶变的物质

• 批准号: 00J60902
• 负责人: 和田 俊一
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-00J60902/
• 关键词: TPU0015A; DLD-1; リボゾームS6サブユニット; caspase 3; p27; ERK; IkB; TPU2013

前年度に引き続き、糸状菌由来テルペノイドTPU0015Aのがん細胞足場非依存的増殖阻害作用機構の解析を行った。TPU0015Aにより処理を行った大腸がん由来DLD-1細胞における各種癌遺伝子およびアポトーシス関連遺伝子の発現量の変化、リン酸化状態の変化をウェスタンブロッティングにより解析した。前年度までに見られたリボゾームS6サブユニットのリン酸化の向上やcaspase 3の活性化に加え、TPU0015A処理細胞において、p27の発現量やERKのリン酸化の上昇およびIkBのリン酸化量の減少が見られた。また、抗リン酸化PKA基質抗体を用いたタンパク質リン酸化の検出パターンにもいくつかの変化が見られた。こうした解析に並行して、本年度は新たにTPU0015Aの直接的な標的となるタンパク質を同定するための実験を行った。本物質自体は、生産菌からの収量が限られるため、まず大量に化学合成することができ、活性を保持する類縁体を用意することとした。足場存在下の細胞への毒性も高まったものの、TPU2008、TPU2009、TPU2013などにTPU0015Aと類似した活性が見られた。このうちTPU2013を用いて以降の実験を行うこととした。本化合物群の構造中、側鎖部位が最も活性への関与が低いことが予想されたことから、この部位をビオチン化したTPU2013を用意した。DLD-1細胞抽出液中にビオチン化TPU2013を加え、ストレプトアビジン結合セファロースによって沈殿させる方法で、TPU2013結合タンパク質の探索を行ったところ、約45kDaおよび約60kDaのタンパク質の特異的な結合が見られた。

The analysis of the mechanism of cell-based field-independent growth inhibition of TPU0015A was carried out in the previous year. TPU0015A is a process for the analysis of the expression of various cancer genes and related genes in DLD-1 cells. In the previous year, the activity of caspase 3 was increased, the expression of p27, the increase of ERK and the decrease of IkB were increased in TPU0015A treated cells. The anti-PKA matrix antibody was used to detect the presence of p-PKA in the serum. This year, the new TPU 0015A is the direct target of the new TPU0015. The substance itself is produced by bacteria in limited quantities, and is chemically synthesized in large quantities. The activity of the substance is maintained. High cytotoxicity in cells in the presence of foot field, TPU2008, TPU 2009, TPU2013 and TPU 0015A similar activity was observed. Tpu2013 is used to reduce the number of people who have died. In the structure of the compound group, the position of the side lock is the most active and the position of the side lock is the lowest. TPU2013 was added to DLD-1 cell extract, and the specific binding of TPU2013 to DLD-1 cell extract was observed. The specific binding of TPU2013 to DLD-1 cell extract was observed.

项目成果

Shun-ichi Wada, Masakazu Niimi, Kyoko Niimi, Ann R.Holmes, Brian C.Monk, Richard D.Cannon, Yoshimasa Uehara: "Candida glabrata ATP-binding cassette transporters Cdr1p and Pdh1p expressed in Saccharomyces cercvisiae strain deficient in membrane transporter

Shun-ichi Wada、Masakazu Niimi、Kyoko Niimi、Ann R.Holmes、Brian C.Monk、Richard D.Cannon、Yoshimasa Uehara：“光滑念珠菌 ATP 结合盒转运蛋白 Cdr1p 和 Pdh1p 在膜转运蛋白缺陷的酿酒酵母菌株中表达

Shun-ichi Wada, Sachi Sri Kantha, Takahiro Yamashita, Shigeki Matsunaga, Nobuhiro Fusetani, Shugo Watabe: "Accumulation of H^+ in vacuoles induced by a marine toxin, theonellamide F, in rat embryonic 3Y1 fibroblasts"Marine Biotechnology. 4. 571-582 (2002)

Shun-ichi Wada、Sachi Sri Kantha、Takahiro Yamashita、Shigeki Matsunaga、Nobuhiro Fusetani、Shugo Watabe：“在大鼠胚胎 3Y1 成纤维细胞中，海洋毒素 Theonellamide F 诱导的液泡中 H^ 的积累”海洋生物技术。