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タンパク質のフレキシビリティーが標的分子認識機能において果す役割の解析とその制御

蛋白质柔性在靶分子识别功能及其调控中的作用分析

基本信息

批准号：
12019240
负责人：
功刀滋
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

高圧力としては50MPa以上300MPa以下のいわゆる可逆的変化領域と350MPa以上(700MPa以下)の不可逆的領域およびそれらの中間的領域の3領域に区分して検討した。これらの領域ではすでに単純酵素系では通常条件下とは大変異なる触媒機能の発揮されることが知られており、その根源となる構造上の変化をとらえ、触媒・分子認識能の詳細な変化を調査した。測定対象としては、前年度に引き続き、従来申請者がその機能について十分な研究経験を積んできたプロテアーゼ反応とりあげる一方、アミラーゼ、クレアチンキナーゼなどを対象として加えて検討した。方法論としては、タンパク質-標的分子間相互作用の解析と通常の反応速度論的解析とを常圧・高圧用の吸光度法・蛍光光度法、迅速反応解析装置等によって行うと共に、構造的解析には高圧下、復圧下での蛍光測定(in situおよびex situ)に加え、蛋白質のプロテアーゼ分解を行い、分解個所の特定をシークエンサー・(常圧での)NMR解析により行った。さらに、アフィニティーラベル法に使用する標的分子の基礎的側面を検討するとともに、高圧下での低温変性過程を詳細に調べた。これらの成果をもとに、タンパク質の可撓性あるいはフレキシビリティーと特異的分子認識能との関係を明らかにし、新たなる分子認識能を有するタンパク質の創出に展開した。

High pressure is not less than 50MPa and not more than 300MPa. Reversible transformation area is not less than 350MPa (not more than 700MPa). Reversible transformation area is not more than 300 MPa. In this field, pure enzyme systems are investigated in detail for the development of catalytic functions under normal conditions. The measurement target is the previous year's introduction, the applicant's function is very important, the research target is very important, the applicant's function is very important. Methods: Analysis of mass-target molecular interactions: Analysis of general reaction velocity theory: Absorption spectrophotometry: Spectrophotometry: Rapid reaction analyzer: Analysis of structural reaction: Spectrophotometry: Spectrophotometry (in situ), protein decomposition, decomposition of a specific site, NMR analysis In addition, the basic surface of the target molecule used in this method is discussed in detail at low temperatures and high pressures. The results show that the flexibility of molecular cognition is the key factor to the development of molecular cognition.