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抗腫瘍単鎖抗体の作製とその臨床応用のための基礎的検討

抗肿瘤单链抗体制备及其临床应用的基础研究

基本信息

批准号：
12019268
负责人：
吉川和宏
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Aichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12019268/
关键词：
単鎖抗体 scFv

项目摘要

(目的)腫瘍に特異的に発現する抗原を認識する組み換え型単鎖抗体(scFv)を作製し、臨床応用のための基礎的検討を行うことが本研究の目的である。そのモデルとしてヒトグリオブラストーマを選んだ。グリオブラストーマにはEGFR(Epidermal growth factor receptor)の発現が認められるが、この遺伝子の一部を欠損している腫瘍細胞があり、この欠損部の再構成の結果、正常な分子内には無い新しいアミノ酸が発現する。この分子は腫瘍特異的に発現しているため治療等の標的分子として非常に有望と思われる。そこでこの変異EGFRを認識するマウスモノクローナル抗体(3C10)を作製し、この抗体の組み換え型単鎖抗体の作製を試み、臨床応用のための基礎的検討を行った。(結果)1.単鎖抗体は大腸菌により生産し、inclusion bodyとして回収した。Ureaによる可溶化後、Rapid dilution法によりrefoldingを行った。さらにエピトープを含むペプチドを用いたアフィニティーカラムにより、活性ある抗体の精製を行った。2.元抗体と比較し単鎖抗体のアフィニティーはおよそ1/4に落ちていた。しかし、ペプチド抗原を用いたELISA、変異EGFRを発現する細胞を用いたMHA、またヒト腫瘍を用いた免疫染色を比較した結果、元抗体と同様の反応性を保っていた。3.99mTcを容易に標識できることが確認できたため、標識抗体を用いて生体内の腫瘍への集積性を検査した。24時間後の腫瘍/血液比は、元抗体が15、単鎖抗体が3を示し、単鎖抗体の生体内における腫瘍への集積性も保たれていることが確認できた。

Objective: To investigate the development of tumor-specific antigens, the production of anti-scFv antibodies, and the basic research for clinical use.そのモデルとしてヒトグリオブラストーマを选んだ。EGFR(Epidermal growth factor receptor) was found in the tumor cells with partial damage, and no new EGFR was found in the normal molecules. These molecules are very promising targets for therapy. The basic research on the production and clinical application of anti-EGFR antibody (3C10) was carried out. (Results)1. Antibodies are produced by E. coli, and inclusion bodies are recovered. Urea dissolution, Rapid dilution method, Refoldingさらにエピトープを含むペプチドを用いたアフィニティーカラムにより、活性ある抗体の精制を行った。2. Meta-antibody comparison: Antibodies are 1/4 of the time. The results of immunostaining were compared with those of MHA and EGFR. 3.99mTc is easy to identify and identify, and the accumulation of tumor cells in vivo is examined using labeled antibodies. After 24 hours, the tumor/blood ratio was 15, the antibody was 3, and the antibody was confirmed in vivo.