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蛍光エネルギー移動測定による分子モーターミオシンのエネルギー変換機構の研究

利用荧光能量转移测量研究分子运动肌球蛋白的能量转换机制

基本信息

批准号：
12030212
负责人：
三木正雄
金额：
$ 1.15万
依托单位：
University of Fukui
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12030212/
关键词：
蛍光エネルギー移動分子モーターミオシンアクチン

项目摘要

本プロジェクトはモータータンパク質であるミオシンが、ATP加水分解時に化学エネルギーをアクチンと相互作用して力学エネルギーに変換する機構を明らかにする為、蛍光エネルギー移動測定によってミオシン上の特異的な2つの部位間の距離を測定し、それがミオシンの生理機能に対応してどのように距離を変化させるかを調べることによって、構造的な情報を得ることである。ミオシンS1の50KDaのlower domainにあり、又アクチン結合部位近くであるLys-533または、20KDaにあるSH1(Cysteine-707)に、それぞれ蛍光色素を結合させたミオシンS1を調製した。これらの特異的な部位間での大きな構造変化はみいだせていない。ミオシンの三次元構造に基づいて特定部位にラベルを導入できるように遺伝子工学で変異ミオシンを調製することが不可欠と思われる。一方、アクチンとミオシンとの相互作用がATP加水分解によってどのような構造変化をするのかを調べる為にアクチンのGln-41やLys-61あるいは、Cys-374にそれぞれ蛍光色素を結合させた。これらミオシンS1とアクチンのそれぞれの色素間の距離を、定常励起光による蛍光エネルギー移動測定によって測定した。一方今年度に新たに導入したストップトフロー吸光蛍光分光計によって、まずアクチンとミオシン複合体が,ATP添加により解離していくキネテックスを吸光度の変化より追跡した。今後は、上記蛍光色素をラベルしたミオシンとアクチンを使って、それらの間のエネルギー移動測定をミリ秒時間分割測定することにより、それらの多くの部位間の距離測定から多面的に調べることによって、ミオシンモーターのアクチン上での動きを明らかにしていきたい。

This プロジェクトはモータータンパク性であるミオシンが, when ATP is decomposed by adding water, chemical エネルギーをアクチンとInteraction してMechanics エネルギーに変change するMechanism を明らかにする为、荍光エネルギーMove Measuring the distance between the specific parts of the によってミオシンののな2つののmeasurementし、それがミオシンのphysiological functionに対応してどのようにDistanceを変化させるかを动べることによって、structured informationをgetsることである.ミオシンS1の50KDaのlower domain にあり, and アクチン combining site close くであるLys-533 または, 20KDa にあるS H1(Cysteine-707), それぞれ蛍光pigment を combined with させたミオシンS1をmodulation した. The specific structure of the specific parts of the body is changed.ミオシンのthree-dimensional structure にbased づいてspecific parts にラベルを imported できるように伝子工学で変 Different ミオシンを Modulation することが不了と思われる. One side, アクチンとミオシンとのinteraction がATP added water decomposition によってどのようなstructural change をするのかを Adjustment べるIt is a combination of にアクチンのGln-41やLys-61あるいは and Cys-374 にそれぞれ蛍photopigment. The distance between これらミオシンS1とアクチンのそれぞれのpigment, Constantly excited light, light, light, movement and measurement, measurement and measurement. This year, one of the new companies introduced the new absorption spectrometers, including the したストップトフローabsorption spectrometer,オシン complex が, ATP addition により dissociation していくキネテックスを absorbance の変化より tracing した. From now on, I will write down the をラベルしたミオシンとアクチンを Makerれらの间のエネルギーMovement measurementをミリSecond time division measurementすることにより, Measuring the distance between parts of the multi-faceted multi-faceted multi-faceted multi-layered multi-surface .