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HIVアクセサリー遺伝子VPRによる細胞周期異常とHIV-LTR活性

HIV辅助基因VPR引起的细胞周期异常和HIV-LTR活性

基本信息

批准号：
12035230
负责人：
志村まり
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Research Institute, International Medical Center of Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12035230/
关键词：
HIV アクセサリー遺伝子VPR 細胞周期異常 HIV-LTR活性抗HIV治療薬フラボノイド

项目摘要

1)細胞株の樹立-VPR発現調節可能な細胞株MIT-23-テトラサイクリン反応性プロモーターによる遺伝子発現系を用いて、VPRの機能を自由に調節できる細胞株(以下MIT-23)を樹立した。2)細胞周期異常とHIV-LTRMIT-23にHIV-LTR Enhanced Green Fluorescence Protein(EGFP)遺伝子を導入し、HLEG-29を得た。HLEG-29は、DOX添加によるVPRの発現が誘導され、MIT-23同様の細胞周期異常と共に、HIV-LTR下流のEGFP発現増大が認められる。VPRの発現していない細胞で、Nocodazol同調後の4Nの細胞集積では、EGFPの発現が認められないことにより、HIV-LTRプロモーターにVPRが作用したことが示唆される。興味深いことに、VPRの発現したHLEG-29のDNA量(2N,4N,8N)ごとにEGFP強度を分析すると、2Nより4N/8Nの細胞集団でより高いEGFPの発現が認められた。これらは、単にDNA量ではなく、VPRによりDNA量の増大した細胞集団にHIV-LTR活性を上昇させる因子が存在していることを示唆する。3)VPRよるHIV-LTR活性を上昇させる因子の解明これまでに、VPRによりDNA量の増大した細胞集団では、NF-kBの発現増大とNF-kBの核内移行が認められた。今後の課題として、VPR発現に伴うNF-kBの核内移行のメカニズムを明らかにする。4)新規化合物のスクリーニングフラボノイド28種の生薬および2種のフラボノイドについて、MIT-23細胞を用いてVPRの機能に対する作用を解析した。その結果、5μMケルセチン(QCT)の添加により、VPR発現により誘発される細胞の4N及び8Nでの貯留が、約50%抑制された。さらにHLEG-29細胞を用いた実験より、ケルセチンは抗HIV-LTR作用があることが明らかになった。HIV-LTR活性を上昇するメカニズムの解明は、新しい抗HIV治療薬の開発にも有用と思われる。

1)Cell line MIT-23-A cell line with the ability to regulate VPR expression was established. 2)Cell Cycle Abnormality: HIV-LTRMIT-23: HIV-LTR Enhanced Green Fluorescence Protein(EGFP) Gene Introduction: HLEG-29: HLEG-29, DOX addition, induction of VPR, MIT-23, cell cycle abnormalities, and increased EGFP production downstream of HIV-LTR were identified. The expression of VPR in cells, the accumulation of 4N cells after Nocodazole homology, the expression of EGFP, the role of VPR in HIV-LTR, and the expression of VPR in cells after Nocodazole homology. HLEG-29 DNA quantity (2N, 4N, 8N) and EGFP intensity were analyzed. The amount of DNA in the cell population increases, and the activity of HIV-LTR increases. 3) The increase of VPR activity, the increase of HIV-LTR activity, the increase of VPR activity, the increase of DNA content, the increase of NF-kB activity, and the increase of NF-kB migration in the nucleus were identified. Future issues, VPR development and NF-kB migration in the nucleus of the future. 4)The new compounds were identified for 28 bioactivities and 2 bioactivities, and their effects on the function of VPR in MIT-23 cells were analyzed. The results showed that the addition of 5μM CCT, the induction of VPR, the retention of 4N and 8N in the cells, and the inhibition of 5 μ M CCT were approximately 50%. HLEG-29 cells are resistant to HIV-LTR HIV-LTR activity increases, and the development of new anti-HIV therapies may be useful.