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植物マイコプラズマのゲノム構造と機能ネットワークの解析

植物支原体基因组结构和功能网络分析

基本信息

批准号：
12206031
负责人：
宮田伸一
金额：
--
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

植物マイコプラズマは国内外で農業上甚大な被害を与えている。植物の花組織や茎頂組織の形態形成に影響を及ぼすことや植物及び昆虫を宿主とするなど、生物学上興味深い特徴も持っている。しかし培養が困難なため、病害発生機構の解明は非常に立ち遅れている。そこで本研究では、植物マイコプラズマのゲノム構造の全容を解明することで、その病理の分子機構に関する基盤的知見を得ることを目的とした。細胞内寄生性の植物病原細菌として初のゲノム解析となり、ゲノムの機能ネットワークを解明する端緒となることが期待される。本研究ではゲノムの全体像の把握を目指し、一次構造の解析の準備に着手した。良質なゲノミックライブラリーを構築するには純粋なゲノムDNAの大量精製が重要であるため、植物マイコプラズマの大量増殖系の確立に取り組んだ。植物マイコプラズマのゲノム解析に用いる系統は、16S rRNAによる系統解析から最大のグループに属するタマネギ萎黄病ファイトプラズマ(OY-W)を選択し、宿主にはシュンギクを用いた。液体窒素中で1時間以上篩部組織を破砕し、分画遠心分離により精製植物マイコプラズマ画分を得た。さらにゲノムDNAの精製のためパルスフィールドゲル電気泳動(PFGE)を行い、約1Mbpのゲノムを含むDNA画分を得た。種々の検定植物を用いたサザン解析により、篩部組織を豊富に含むシュンギクは宿主として最適であることが明らかとなった。これは篩部局在性であることに一致し、宿主としての親和性も高いことが示された。PFGEによりげのむDNAの精製度を高めたが、高分子DNAであることからアガラーゼを用いての回収率は非常に低く、良質なライブラリーの構築にはさらなる回収率の向上が必要であることが示唆された。

The plant is very important in agriculture at home and abroad. Plant flower tissue and shoot apex tissue morphogenesis affect plant and insect hosts, and are biologically interesting and persistent. It is difficult to cultivate, and the mechanism of disease development is very difficult to solve. The purpose of this study is to understand the structure of plants and the molecular mechanisms involved. Analysis of intracellular parasitic phytopathogenic bacteria and their functions This study is aimed at understanding the whole image and preparing for the analysis of primary structure. The quality of DNA is important for the purification of large amounts of DNA, and the establishment of large numbers of plant colonies is important for the construction of pure DNA The system analysis of the plant is based on the 16S rRNA. The system analysis of the plant is based on the OY-W. The liquid is extracted from the sieve tissue for more than one time, and the separation is carried out remotely. In addition, the purification of DNA was carried out by PFGE, which was about 1Mbp in length. The species is selected from the group consisting of plants, plants and tissues. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone else. PFGE is a high-quality DNA molecule, and its recovery rate is very low and high.