ヒト不死化細胞株を用いた各種腫瘍組織における癌関連遺伝子異常の解析

使用人类永生化细胞系分析各种肿瘤组织中与癌症相关的遗传异常

• 批准号: 12213109
• 负责人: 森内 良三
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213109/
• 关键词: がん関連遺伝子; ヒト不死化細胞; ATL; HTLV-1; Tgat; Trio; RhoGEF; 発現cDNAライブラリー

【目的】成人T細胞白血病ウイルス(HTLV-1)による発がん機構の研究は、特異的な転写活性化因子であるTAXの機能解析を中心に行われ、発がん初期段階において重要な役割を担っていることは明らかである。しかしながら、HTLV-1感染からATL発症にいたる細胞側要因は未だ解明されていない。本研究では、ATL腫瘍細胞特異的に活性化されたがん関連遺伝子をクローニングし、その構造・機能を解析することを目的とした。【方法】新鮮ATL腫瘍細胞から直接RNAを抽出し、発現cDNAライブラリーを作製した。NIH3T3またはヒト不死化細胞株RPE-1に導入後、フォーカスを形成した細胞からPCR法にてcDNAをレスキューし、その構造と機能解析を行った。【結果・考察】フォーカス形成能、軟寒天におけるコロニー形成能、およびヌードマウスにおける腫瘤形成能のすべてを有するcDNA(transforming gene in ATL tumor cell;Tgat)を得た。その遺伝子構造は、全長1574bpで、255個のアミノ酸をコードするORFを有していた。そのアミノ酸配列はDbl familyに属するTRIOのGEF-D2と相同であった(TRIOはspectrin-like domain,GEF-D1,PH-D1,GEF-D2,PH-D2,Ig-like domain,S/T kinase domainを有する多機能タンパク質である)。しかし、ORF領域の一部、及び3′-UTR領域はデータベース上の既知のcDNAやESTとhomologyを示さなかった。TRIOゲノム配列との比較の結果、Tgatは選択的スプライシングによってTRIOのGEF-D2をコードする9個のエクソンとtrio遺伝子の下流に存在する1個のエクソンで構成されることが明らかとなった。Tgatは正常ヒトやHTLV-1健常キャリア末梢血リンパ球、およびヒトT細胞株、HTLV-1感染細胞株であるMT-2では全く発現していないが、急性型ATLおよび一部の慢性型ATL、さらにATL腫瘍細胞由来と考えられる細胞株で特異的に発現していた。Tgatに特異的な領域であるC末を欠失させるとトランスフォーム能は消失し、またTgatをNIH3T3細胞やSwiss3T3細胞に一過性あるいは定常的に発現させることでアクチンストレスファイバーが明瞭に観察できた。すなわち、TgatはRhoの下流のエフェクターを活性化すること示しており、TgatのATL腫瘍細胞における異所性発現が細胞の悪性度や浸潤能などになんらかの影響を与えている可能性が示唆された。

【 objective 】 adult T cell leukemia ウ イ ル ス (HTLV - 1) に よ る 発 が ん は の research, specific な planning write activation factor で あ る TAX の function analytical を center line に わ れ, 発 が ん early Duan Jie に お い て cut を bear important な service っ て い る こ と は Ming ら か で あ る. <s:1> ながら, HTLV-1 infection ら らATL occurrence に たる たる the main cause of the cell side is されて not だ clarified されて な な な. This study で は swollen sores, ATL cell specific に activeness さ れ た が ん masato even heritage 伝 son を ク ロ ー ニ ン グ し, そ の structure, function analytical す を る こ と を purpose と し た. 【 Method 】 Fresh ATL abscess cells ら ら direct RNAを were extracted to create <s:1> cDNAラ ブラリ ブラリ を を to prepare た た. NIH3T3 ま た は ヒ ト undead cell lines after RPE 1 に import and フ ォ ー カ ス を form し た cells か ら PCR method に て cDNA を レ ス キ ュ ー し, そ の tectonic line と function analytical を っ た. Results, examine 】 【 フ ォ ー カ ス formation energy, soft sees に お け る コ ロ ニ ー formation energy, お よ び ヌ ー ド マ ウ ス に お け る tumor formation can の す べ て を have す る cDNA (transforming gene in ATL tumor cell; Tgat) を た. そ の heritage 伝 tectonic は, total length of 1574 bp で, 255 の ア ミ ノ acid を コ ー ド す る ORF を have し て い た. Youdaoplaceholder0 ア ア ア ノ ノ acids are in sequence with そ Dbl familyに belonging to するTRIO <e:1> GEF-D2と the same であった(TRIO と spectrin-like domain,GEF-D1,PH-D1,GEF-D2,PH-D2,Ig-like domain,S/T kinase) The domainを has する multifunctional タ パ パ and である. し か し, areas of ORF の a, and 3 'UTR - び は デ ー タ ベ ー ス の on both know の cDNA や EST と homology を shown さ な か っ た. For any partial or ゲ ノ ム match column と の is の results, Tgat は sentaku of ス プ ラ イ シ ン グ に よ っ て price の GEF - D2 を コ ー ド す る nine の エ ク ソ ン と for any partial or heritage 伝 son の obscene に exist す る 1 の エ ク ソ ン で constitute さ れ る こ と が Ming ら か と な っ た. Tgat は normal ヒ ト や HTLV - 1 health often キ ャ リ リ ア peripheral blood ン パ ball, お よ び ヒ ト T cell lines, infection of HTLV - 1 cell line で あ る MT - 2 で は full く 発 now し て い な い が, acute ATL お よ び a の type chronic ATL, さ ら に ATL swollen sores cell origin と exam え ら れ る cell lines で specific に 発 now し て Youdaoplaceholder0 た. Tgat に specific areas of な で あ る を owe at the end of the C loss さ せ る と ト ラ ン ス フ ォ ー ム can disappear は し, ま た Tgat を NIH3T3 cells や Swiss3T3 cells に transient あ る い は constant of に 発 now さ せ る こ と で ア ク チ ン ス ト レ ス フ ァ イ バ ー が clear に 観 examine で き た. す な わ ち, Tgat は Rho の obscene の エ フ ェ ク タ ー を activeness す る こ と shown し て お り, Tgat の ATL cells swollen sores に お け る sex 発 now が cells by different の 悪 や infiltration sex can な ど に な ん ら か の influence を and え て い が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

Seki M.: "Up-regulation of human T lymphotropic virus type 1 (HTLV-1) tax/rex mRNA in infected lung tissues."Clin Exp Immunol.. 120. 488-498 (2000)

Seki M.：“受感染肺组织中人类 T 淋巴细胞病毒 1 型 (HTLV-1)tax/rex mRNA 的上调。”Clin Exp Immunol.. 120. 488-498 (2000)

Kopacek J.: "Upregulation of the genes encoding lysosomal hydrolases, a perforin-like protein, and peroxidases in the brains of mice affected with an experimental prion disease."J Virol.. 74. 411-417 (2000)

Kopacek J.：“受实验性朊病毒病影响的小鼠大脑中编码溶酶体水解酶、穿孔素样蛋白和过氧化物酶的基因上调。”J Virol.. 74. 411-417 (2000)

Kohno T.: "Identification of Genes Associated with the Progression of Adult T Cell Leukemia (ATL)."Jpn J Cancer Res.. 91. 1103-1110 (2000)

Kohno T.：“与成人 T 细胞白血病 (ATL) 进展相关的基因的鉴定。”Jpn J Cancer Res.. 91. 1103-1110 (2000)

Nakane S.: "Comparative molecular analysis of HTLV-I proviral DNA in HTLV-I infected members of a family with a discordant HTLV-I-associated myelopathy in monozygotic twins."J Neurovirol.. 6. 275-283 (2000)

Nakane S.：“对同卵双胞胎中患有不一致 HTLV-I 相关脊髓病的 HTLV-I 感染家庭成员中的 HTLV-I 前病毒 DNA 进行比较分子分析。”J Neurovirol.. 6. 275-283 (2000)