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インスリン依存性糖尿病特異的ヒト自己抗原のクローニングと発現

胰岛素依赖性糖尿病特异性人类自身抗原的克隆和表达

基本信息

批准号：
05770772
负责人：
森内良三
金额：
$ 0.51万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770772/
关键词：
インスリン依存性糖尿病自己免疫 GAD lambdagtIICDNAライブラリー ICAS

项目摘要

インスリン依存性糖尿病(IDDM)は膵臓beta細胞の破壊が特徴であり、自己免疫反応がその発症機序として考えられている。現時点に於いて最も注目されている自己抗体は分子量64,000のタンパク質に対する抗体であり、IDDM発症を予測しうるマーカーとなっている。1990年、この自己抗体が反応する自己抗原は、グルタミン酸を抑制系のニューロトランスミッターであるGABAに変換する酵素(GAD)であることがBaekkeskovらによって報告された。さらにGADは中枢神経系のみならず膵臓ラ氏島にも存在し、IDDM患者Tリンパ球がGAD刺激に反応することから、GADに対する自己免疫反応がIDDM発症に中心的役割を果たしていると考えられている。GADには異なる遺伝子座にコードされる少なくとも二つの分子(GAD67とGAD65)が存在し、ヒト膵臓型GAD65は1991年Karlsenらによりクローニングされた。1.我々はヒト膵臓型GAD67をクローニングする目的で、米国UCLAのDr.Yoko Mullenより分与されたヒト膵臓ラ氏島を用いてlambdagtIIcDNAライブラリーを作製しラット膵臓からPCR法を用いて分離したDNAをプローブとしてスクリーニングした。その結果、ヒト膵臓由来のGAD67のクローニング、塩基配列の決定、及び大腸菌での発現に成功した。またヒト膵臓型GAD65も同時にクローン化する事ができた。得られたそれぞれのクローンを発現ベクターに組み込み後、真核細胞にて過剰発現させ、これを用いた抗GAD抗体のアッセイにも成功した。2.一方IDDM患者血清中には、抗GAD抗体以外にも未知の膵臓ラ氏島細胞成分に対する自己抗体(ICAs)が存在することが知られているが、我々は既にIDDM患者血清を用いてlambdagtIIcDNAライブラリーをスクリーニングし、患者血清と反応するクローンを得ているので、このクローンの解析も行う予定である。

The characteristics of beta cell breakdown in IDDM and the development mechanism of IDDM are discussed. At present, the most important thing is that our antibody has a molecular weight of 64,000. In 1990, Baekkeskov published a report on the development of anti-GABA-converting enzymes (GAD) in the context of the anti-GABA-inhibiting system. GAD is the central nervous system and the central nervous system in IDDM patients. GAD is the central nervous system in IDDM patients. GAD67 and GAD 65 exist in the same region as Karlsen in 1991. 1. We used the LambdagtII cDNA to isolate DNA by PCR. The results of the study, the identification of GAD67, the determination of the nucleotide sequence, and the discovery of E. coli were successful. The GAD65 is a new type of mobile phone. In order to achieve this goal, we need to develop a new method of anti-GAD detection. 2. In addition to anti-GAD antibodies, the presence of anti-GAD antibodies (ICAs) in IDDM serum is unknown. We have determined the presence of anti-GAD antibodies in IDDM serum.