染色体複製開始に関わる核キナーゼ活性の時間空間的な制御機構の解析

染色体复制启动中核激酶活性时空控制机制分析

• 批准号: 12215034
• 负责人: 佐藤 憲子
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215034/
• 关键词: 染色体複製; 細胞周期; Cdc7キナーゼ

真核生物染色体複製開始はCdc7-ASKキナーゼによって制御されると考えられている。Cdc7のキナーゼ活性は制御サブユニットであるASKがCdc7に結合することによってはじめて活性化される。また細胞周期を通してCdc7蛋白質の発現量は一定であるのに対し、ASK蛋白質の発現量がG1後期からS期を通じて上昇する。細胞への一過性の発現系においてCdc7のキナーゼ活性はASKと共発現している限り保持されており、その活性はCdc7抗体免疫沈降複合体のin vitro kinase activity及び、in vivoでの内在性のMCM2蛋白質をリン酸化する活性の両者によって評価できる。我々はASK分子のCdc7結合および活性化に必要な領域を同定し、Cdc7活性化分子として約170アミノ酸からなる領域にASK分子を最小化した。この領域にはASK/Dbf4ファミリーに保存されるmotif Mおよびmotif Cが含まれる。さらに、motif CのZn finger領域近傍の保存されたアミノ酸の置換により、Cdc7には結合するが、全く活性化しない変異分子を作製した。さらに、これらの分子の挙動を可視化して時間空間的に解析するために、CFPあるいはYFP融合蛋白質を作製した。野生型のCFP-ASK,YFP-Cdc7あるいはCFP-Cdc7,YFP-ASKは同一細胞に発現した場合、局在を一にする。現在、IRESを含むレトロウイルスベクターを用いて、Cdc7およびASK(野生型および変異型)を同時に発現した細胞を作製し、細胞周期や染色体複製反応における両蛋白質の挙動を検討中である。

The replication of eukaryotic chromosomes begins with Cdc7-ASK control. Cdc7 のキナーゼactivated control サブユニットであるASKがCdc7にcombination することによってはじめてactivated される.またCell cycle をpass してCdc7 protein の発开户 is certain であるのに対し, ASK protein の発开户 がG1 late stage からS phase を通 じてrise する. Transient changes in cells are related to the activity of Cdc7 and ASK.しているlimitりmaintain されており、そのActivityはCdc7 Antibody Immunoprecipitation Complexのin In vitro kinase activity and activity, in vivo intrinsic MCM2 protein acidification activity, and in vivo evaluation. The Cdc7 binding of the ASK molecule is necessary to activate the molecule, and the Cdc7 activating molecule is about 170 ASK molecules that are minimized in the field.この区にはASK/Dbf4ファミリーに Save されるmotif Mおよびmotif Cが contain まれる.さらに, motif CのZn finger field close to the preservation of the されたアミノacid のreplacement により, Cdc7 には combination するが, full く activation しない変 isotope molecule を production した.さらに、これらのmolecule movementの挙をvisualizationしてanalysis of time and spaceするために、CFPあるいはYFP fusion proteinをproductionした. Wild-type CFP-ASK, YFP-Cdc7 and CFP-Cdc7, YFP-ASK are all in the same cell. Now, IRES is a むレトロウイルスベクターを use いて, Cdc7 およびASK (wild type および変 abnormal type ) At the same time, the cells are produced, the cell cycle is replicated, and the chromosomes are replicated and reversed. The proteins are moved at the same time.