細胞接着におけるRho-mDia系の機能と作用機構の解明

阐明 Rho-mDia 系统在细胞粘附中的功能和作用机制

• 批准号: 12215140
• 负责人: 富永 知子
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Dokkyo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215140/
• 关键词: Rho; mDia; DIP; 細胞接着斑; がん化能

低分子量G蛋白質Rhoの標的蛋白質であるRho kinaseとmDiaは、協調してアクチン細胞骨格の構築を調節するが、mDiaの下流でSrc kinaseが関与してアクチン細胞骨格の構築のみならず、細胞質分裂、転写活性を調節することを見いだした(関連論文参照)。本研究においては、Yeast Two-Hybrid法を用い新たに見いだしたmDia結合蛋白質の一つ、DIP(Diaphanous Interacting Protein)についてその細胞内機能を検討した。生化学的に、DIPとmDiaの結合部位を明らかにすると共に、細胞内で、DIPがmDiaおよびSrc kinaseと細胞接着斑においてco-localizeすることを見いだし、細胞接着斑におけるDIPの機能を検討中である。また、DIPが、Grb2と結合することも見いだし、DIPの種種の変異体を用い、Focus Formation Assayを施行し、DIPが細胞のがん化能に影響を及ぼすことも明らかになった。Rho系とRas系とのクロストークを明らかにするため、更に検討を加えている。また、Yeast Two-Hybrid法を用いて見いだした他のmDia結合蛋白質は、既知の転写調節因子であるが、mDiaの一過性強発現により、この核内蛋白質が細胞質へ移動することを見いだした。この機序として、mDiaが核内に入り得ることを細胞レベルで明らかにした。今後更に、mDiaとこの核内蛋白質の結合の意義を、生理的条件下で明らかにする予定である。関連論文:Tominaga,T.et al.2000 Diaphanous-related formines bridge Rho GTPases and Src tyrosine kinase signaling.Mol.Cell 5,13-25.

我们发现，低分子量G蛋白Rho的靶蛋白Rho激酶和MDIA协调地调节了肌动蛋白细胞骨架的构建，但是SRC激酶的下游参与了MDIA的下游，以调节不仅造成肌动蛋白细胞骨骼的构建，还可以调节肌动蛋白的构建，还可以调节细胞力学和透明纸张（请参阅相关纸张）。在这项研究中，我们使用酵母双杂交方法研究了新发现的MDIA结合蛋白之一（diaphanous相互作用蛋白）的细胞内功能。从生物化学上讲，我们发现DIP和MDIA的结合位点已显示出来，并且发现DIP与MDIA和SRC激酶在细胞粘附中共定位，目前正在研究细胞粘附中DIP的功能。还发现DIP与GRB2结合，并使用各种倾斜的突变体使用了焦点形成测定，表明浸出会影响细胞的癌症产生能力。正在进行进一步的考虑，以阐明RHO和RAS系统之间的串扰。此外，使用酵母双杂交方法发现的其他MDIA结合蛋白是已知的转录调节剂，但已发现MDIA的瞬时强表达会导致该核蛋白迁移到细胞质中。这种机制在细胞水平上显示出MDIA可以进入细胞核。将来，我们计划进一步阐明MDIA在生理条件下与该核蛋白质的结合的重要性。相关论文：Tominaga，T。等。 2000与diaphanous相关的甲桥桥接Rho GTPase和SRC酪氨酸激酶信号传导。摩尔细胞5,13-25。