細胞接着におけるRho-mDia系の機能と作用機構の解明

阐明 Rho-mDia 系统在细胞粘附中的功能和作用机制

• 批准号: 12215140
• 负责人: 富永 知子
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Dokkyo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215140/
• 关键词: Rho; mDia; DIP; 細胞接着斑; がん化能

低分子量G蛋白質Rhoの標的蛋白質であるRho kinaseとmDiaは、協調してアクチン細胞骨格の構築を調節するが、mDiaの下流でSrc kinaseが関与してアクチン細胞骨格の構築のみならず、細胞質分裂、転写活性を調節することを見いだした(関連論文参照)。本研究においては、Yeast Two-Hybrid法を用い新たに見いだしたmDia結合蛋白質の一つ、DIP(Diaphanous Interacting Protein)についてその細胞内機能を検討した。生化学的に、DIPとmDiaの結合部位を明らかにすると共に、細胞内で、DIPがmDiaおよびSrc kinaseと細胞接着斑においてco-localizeすることを見いだし、細胞接着斑におけるDIPの機能を検討中である。また、DIPが、Grb2と結合することも見いだし、DIPの種種の変異体を用い、Focus Formation Assayを施行し、DIPが細胞のがん化能に影響を及ぼすことも明らかになった。Rho系とRas系とのクロストークを明らかにするため、更に検討を加えている。また、Yeast Two-Hybrid法を用いて見いだした他のmDia結合蛋白質は、既知の転写調節因子であるが、mDiaの一過性強発現により、この核内蛋白質が細胞質へ移動することを見いだした。この機序として、mDiaが核内に入り得ることを細胞レベルで明らかにした。今後更に、mDiaとこの核内蛋白質の結合の意義を、生理的条件下で明らかにする予定である。関連論文:Tominaga,T.et al.2000 Diaphanous-related formines bridge Rho GTPases and Src tyrosine kinase signaling.Mol.Cell 5,13-25.

Low molecular weight G protein Rho target protein Rho kinase and mDia are involved in regulation of cellular skeletal architecture, cytokinesis, and transcription activity (see related papers). In this study, we investigated the intracellular functions of Diaphanous Interacting Protein (DIP) by Yeast Two-Hybrid method. Biochemically, the binding sites of DIP and mDia are identified as co-localised, intracellular, DIP and mDia and Src kinase are identified as co-localised, cellular and cellular. DIP, Grb2, etc. are used in combination with Focus Formation Assay, DIP and Cell Chemistry, etc. Rho is a Ras system. The Yeast Two-Hybrid method was used to detect other mDia-binding proteins, known regulatory factors, and transient strong expression of mDia. The mechanism of this is that the nucleus is in the middle of the cell. In the future, mDia and protein binding in the nucleus will be determined under physiological conditions. Tominaga, T. et al.2000 Diaphanous-related formines bridge Rho GTPases and Src tyrosine kinase signaling.Mol.Cell 5, 13 -25.