酵母スクリーニング系を用いる甘み受容体の検索

使用酵母筛选系统寻找甜味受体

• 批准号: 12876019
• 负责人: 熊谷 英彦
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12876019/
• 关键词: 酵母; スクリーニング; 味覚; 受容体; グルコース

味覚は我々が豊かな食生活を享受するためになくてはならない感覚である。しかしながら味覚のうちで甘みの感知に関しては全く明らかにされていないのが現状である。申請者らは、出芽酵母において3量体Gタンパク質αサブユニットであるGPA2と相互作用する受容体をコードする遺伝子GPR1のクローニングに成功した。出芽酵母においては、代表的な栄養源であるグルコースに対する応答が細胞内cAMPレベルの上昇という形で現れる事が知られているが、GPR1遺伝子を破壊した株においては、グルコース添加後のcAMPの上昇が全く認められなかった。このことから、GPR1は、グルコースを認識して細胞内にシグナルを伝達するグルコース受容体であることが示された。本研究においては、DNAチップを用いた包括的解析を行い、グルコース依存的に転写誘導される遺伝子のなかでGPR1介して誘導が起こる遺伝子の検索を行った。その結果、GPR1遺伝子破壊株においてアミノ酸、核酸生合成系遺伝子の転写レベルが抑制されることを明らかにした。それら遺伝子の中でARG1を選定し、そのプロモーター部位の下流にβガラクトシダーゼ遺伝子を導入したレポータープラスミドを構築し、酵母に導入した。野生株、GPR1遺伝子破壊株に導入した場合、βガラクトシダーゼ活性は、野生株で高いことが示された。本システムをもちいて哺乳類甘み受容体遺伝子のスクリーニングを行う準備を進めている。

I don't know, I don't know. I don't know what to do. I don't know. I don't know. The applicant and the budding yeast were measured by body weight, body weight, alpha body weight, GPA2 interaction, capacitance, GPR1, and success. The sprouting yeast, the representative, the yeast source, the representative, the yeast, the yeast, the yeast, Please tell me that you are not aware of the situation in your cell by using the following information: GPR1, capacitor, receptive body, receptive body, receptacle, receptacle, receptive body, receptacle, capacitor, In this study, we use the analytical data included in the DNA data analysis and the data analysis that depends on the data to guide the data acquisition. The results showed that the nucleic acid synthesis of the GPR1 strain was broken, and the nucleic acid synthesis line was expressed in the nucleic acid synthesis line. The ARG1 is selected, the yeast is loaded, and the yeast is loaded. Wild plant, GPR1 seed broken plant, β plant, wild plant and wild plant. This program is designed to prepare for the preparation of mammalian recipients.

项目成果

Ashida H,Tamaki H,Yamamoto,K Kumagai H.: "Molecular cloning of cDNA encoding a-N-acetylgalactosaminidase from Acremonium sp.and its expression in yeast"Arch.Biochem.. 384. 305-310 (2000)

Ashida H、Tamaki H、Yamamoto、K Kumagai H.：“来自顶孢霉属的编码α-N-乙酰氨基半乳糖苷酶的 cDNA 的分子克隆及其在酵母中的表达”Arch.Biochem.. 384. 305-310 (2000)

Inoue M,Hiratake J,Suzuki H,Kumagai H,Sakata K.: "idenilfication of caialytic nucleophile of Escherichia coli gamma-glutamyltranspeptidase by gamma-monofluorophosphono derivative of glutamic acid : N-terminal thr-391 in small subunit is the nucleophile."B

Inoue M、Hiratake J、Suzuki H、Kumagai H、Sakata K.：“谷氨酸的 γ-单氟膦酰衍生物对大肠杆菌 γ-谷氨酰转肽酶的催化亲核试剂进行鉴定：小亚基中的 N 端 thr-391 是亲核试剂。”

Katayama T,Suzuki H,Koyanagi T,Kumagai H.: "Cloning and random mutagenesis of the erwinia herbicola tyrR gene for high-level expression of tyrosine phenol-lyase"Appl Environ Microbiol.. 66. 4764-4771 (2000)

Katayama T、Suzuki H、Koyanagi T、Kumagai H.：“用于高水平表达酪氨酸酚裂解酶的草欧文氏菌 tyrR 基因的克隆和随机诱变”Appl Environ Microbiol.. 66. 4764-4771 (2000)

Ashida H,Yamamoto K,Kumagai H.: "Trypsin Inhibitory activity of bovine fetuin de-O-glycosylated by endo-a-N-acetylgalactosaminidase"Biosci.Biotechnol.Biochem.. 64. 2266-2268 (2000)

Ashida H、Yamamoto K、Kumagai H.：“内切-a-N-乙酰半乳糖胺酶对牛胎球蛋白去-O-糖基化的胰蛋白酶抑制活性”Biosci.Biotechnol.Biochem.. 64. 2266-2268 (2000)

Tamaki, H.: "GPR1 regulates filamentous growth through FLO11 in yeast Saccharomyces cerevisiae"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 267. 164-168 (2000)

Tamaki, H.：“GPR1 通过 FLO11 调节酿酒酵母中的丝状生长”Biochem。