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微生物酵素により合成したγ-グルタミルペプチドの動物脳における薬理作用機構

动物脑微生物酶合成γ-谷氨酰肽的药理机制

基本信息

批准号：
61560118
负责人：
熊谷英彦
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.E.coli K12株のγ-グルタミルトランスペプチダーゼ(GGT)欠損株を取得し、GGTをコードする遺伝子(ggt)の染色体遺伝子上の位置を明らかにした。この結果を利用して、大腸菌染色体の遺伝子ライブラリーより、GGT高活性株を選択した。本株は野性株の5倍のGGT活性を示し、これを酵素源とすることにより、10lの培養液から約56倍の精製で50mgのGGT単一標品を得ることができた(収率40%)。2.このようにして得られたGGT結晶標品を用いて、L-グルタミンとL-ドーパからのγ-グルタミルドーパの酵素合成を試み、その最適条件を検討した。その結果、L-ドーパ,200mM;グルタミン,200mM;NaCl,1M;ビタミンC,50mM;【Na_2】H【PO_4】-NaOH(pH11.0),100mM;GGT,250mU/mlから成る反応液を用いて、30℃で2時間反応させるとき、最大量である140mM(46mg/ml,総量6.18g)のγ-グルタミルドーパを生成せしめることができた。このようにして得たγ-グルタミルドーパをイオン交換カラムクロマトグラフィー等により精製し、絶品1.9g(収率30%)を得た。3.γ-グルタミルドーパメチルエステルの酵素合成も試みたが、ドーパメチルエステルは、反応液中で加水分解され、そのγ-グルタミル化合物を得ることはできなかった。又γ-グルタミルドーパミンの酵素合成は検討中である。4.ラット脳由来のアストログリオーマ細胞C6を培養し、インタクトな細胞がGGT活性を有することを明らかにした。また本細胞をパパイン処理した上澄液にGGT活性が存在することを確認した。5.現在C6細胞を用いて、γ-グルタミルドーパの取り込みについて実験中であり、L-ドーパ取り込みとの比較、L-ドーパ取り込みに対するグルタチオンの添加効果、GGT阻害の影響等について詳細に検討する計画である。

The position of 1.E.coli K12 strain gamma-ray chromosome (ggt) chromosome was not clear, while that of GGT strain K12 was not known. Results the results showed that the strains with high activity of GGT were selected by using the chromosomal spores of Streptomyces spp. The GGT activity of the wild strain was 5 times higher than that of the wild strain, and the activity of the wild strain was 5 times higher than that of the wild strain, the GGT activity of the wild strain was 5 times higher than that of the wild strain, the GGT activity of the wild strain was 5 times higher than that of the wild strain, the activity of the wild strain was 5 times higher than that of the wild strain, and the 50mg activity of the wild strain was 56 times higher than that of the wild strain (40%). two。 The GGT results showed that the optimal conditions for the synthesis of enzymes were determined by the use of the standard standard for the synthesis of enzymes, such as the synthesis of enzymes, the synthesis of enzymes, and the optimal conditions. The results of the experiment, L-temperature, 200mm, 200mm, 200mm, 200mm, 200mm, 50mm, [Na_2] H [PO4]-NaOH (pH11.0), 100mM, GGT, 250mU, ml, respectively. The results showed that the reaction time was 30 ℃ and 2 hours, and the maximum amount of cooling 140mM (46mg/ml, 6.18g) was generated. The quality of the product was 1.9g (30% of the rate). 3. The enzyme synthesis of the enzyme, the decomposition of the enzyme in the reverse solution, the decomposition of the compound in the reverse solution, the synthesis of the enzyme, the synthesis of the enzyme, the decomposition of the compound in the reverse solution, the synthesis of the enzyme, the synthesis of the enzyme, the decomposition of the compound in the reverse solution, the synthesis of the enzyme, the decomposition of the compound in the reverse solution. In addition, the enzyme synthesis of the enzyme was detected in the presence of γ-ray. 4. The cause of the disease is that the cell C6 is not cultured, the cell is GGT active, and the cell is active. In this case, there is a confirmation of the GGT activity in the clarifying solution. 5. Now, in the C6 cell, you can use the computer, the γ-ray device, the computer, and so on.