Parkinのアポトーシス抑制機能の解析

Parkin抑制细胞凋亡功能分析

• 批准号: 12877100
• 负责人: 砂田 芳秀
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kawasaki Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877100/
• 关键词: 若年性パーキンソン病; パーキン(parkin); アポトーシス

Parkinは常染色体劣性若年性パーキンソン症候群(AR-JP)の原因タンパクである。Parkinの生理機能の解明はパーキンソン病の病態理解、すなわち黒質ドーパミンニューロンの選択的細胞死の分子メカニズムを知る上で重要である。最近、parkinがユビキチンリガーゼ活性を持ち、ユビキチン-プロテアソーム系のタンパク分解にかかわることが示された。われわれは、full-lengthのparkinが神経細胞や筋細胞など寿命の長い細胞に優位に発現し、一方リンパ球など寿命の短い細胞ではexon3-5を欠くtranscriptが検出されたことから、parkinはアポトーシス抑制タンパクであるとの作業仮説を考えた。まずU937培養細胞系を用いてアポトーシス誘発によるparkinの発現動態の解析を行ったが、parkinの発現量やsplicingパターンに明らかな変化はみられなかった。Parkin遺伝子変異によるloss of functionがパーキンソン病の発症に関与すると考えられるので、本年度はCOS7やPC12などの培養細胞系にparkinの合成アンチセンスオリゴヌクレオチドを添加してparkin mRNA発現を抑制することで、アポトーシスが誘発されるか検討した。アポトーシスの検出としては色素排除法およびヘキスト試薬染色による形態学的検出と電気泳動によるDNA断片化の検出を指標としたが、いずれの方法でも添加後72時間までの段階でアポトーシスを確認することはできなかった。こうした結果より、parkinのloss of functionが細胞機能に影響を及ぼすのはもう少し長いスパンを要する可能性が示唆された。

Parkin's autosomal inferiority syndrome (AR-JP) is the cause of AR-JP. The understanding of Parkin's physiological function is important for understanding the pathologies of diseases and for understanding the molecular mechanisms of cell death. The most recent, parkin, and activity of the system are: The cell with the longest life span is the cell with the longest life span, and the cell with the shortest life span is the cell with the longest life span. As we analyzed the discovery dynamics of parkin when the U937 cultured cell line was induced by ATOS, the discovery and splicing parameters of parkin clearly changed. This year, the loss of function of parkin gene expression in cultured cell lines COS7 and PC12 was investigated by adding parkin gene expression inhibition to cell lines COS7 and PC12. The detection of DNA fragmentation by pigment exclusion method and electrophoresis method was performed at 72 hours after the addition. The result is that the loss of function affects the function of the cell and the possibility of losing it is indicated.

项目成果

Sunada, Y. et al.: "Caveolin-3 and muscular dystrophy"Acta Myologica. 20・2. 162-167 (2001)

Sunada, Y.等人：“Caveolin-3 和肌营养不良症”Acta Myologica 20・2 (2001)。

Sunada,Y. et al.: "Transgenic mice expressing mutant caveolin-3 show severe myopathy associated with increased nNOS activity"Hum.Mol.Genet.. 10・3. 173-178 (2001)

Sunada, Y. 等人：“表达突变性 Caveolin-3 的转基因小鼠表现出与 nNOS 活性增加相关的严重肌病”Hum.Mol.Genet.. 10・3 (2001)。

Masaki,T. et al.: "Expression of dystroglycan and laminin-2 in peripheral nerve under axonal degeneration and regeneration"Acta Neuropathol.. 99・3. 289-295 (2000)

Masaki, T.等：“轴突变性和再生下周围神经中的肌营养不良聚糖和层粘连蛋白-2的表达” Acta Neuropathol.. 99・3 (2000)。

Sunada, Y. et al.: "Deficiency of a 180-kDa extracellularmatrixproteininFukuyamatype congenital muscular dystrophy skeletal muscle"Neuromuscular Disorders. 12・2. 117-120 (2002)

Sunada，Y.等：“福山型先天性肌营养不良骨骼肌中180-kDa细胞外基质蛋白的缺乏”神经肌肉疾病12・2（2002）。