低分子G蛋白、Rhoの創収縮における役割の解明

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Rho下流エフェクター、ROCKの創収縮への影響を検討するため、ROCK阻害剤、Y-27632による創収縮モデルに対する効果をin vitro,in vivoの実験系で検証した.1.Y-27632(10μM)のin vitro創収縮モデルに対する影響1)コラーゲン内3次元培養線維芽細胞によるコラーゲンゲル収縮を阻害リソフォスファチジル酸(LPA)による急激な収縮はY-27632により完全に阻害され、その後の緩徐な収縮は部分的に阻害された.PDGFによる緩徐な収縮は部分的に阻害された.2)コラーゲンゲル内での細胞長の短縮を阻害LPA投与後の急激な細胞収縮は、Y-27632により完全に阻害された.PDGF投与によっては細胞長は変化しなかった。3)コラーゲン内での細胞の伸長を助長コラーゲン内に細胞を播種した後の細胞長の伸長は、Y-27632治療群にて増強された.4)遊走を阻害ボイデンのケモタキシス・チャンバーにより、LPA,PDGFによる遊走を、Y-27632はdose dependentに阻害した.2.Y-27632のラット創収縮モデルに対する影響ラット背部の1cmx1cm円形皮膚欠損創の創収縮にあたえる影響を検討した.1)連日痂皮を除去し創部にY-27632 30μM(PBS)を投与、2)連日痂皮下にY-27632 30μM(PBS)を注入し、創部をトレースしたが、注入操作や剥離操作によりばらつきが大きく、一貫した結果がえられなかったため、3)浸透圧ポンプにて持続的に創部周囲に5日間投与し、5日目に創サイズを測定したところ、Y-27632治療群で創は優位に大きく、創収縮を阻害することが判明した。これらにより、ROCK阻害剤、Y-27632がin vitro,in vivo両方において、創収縮を阻害することが明らかになった。今後、培養細胞による創治療等に、活性型ROCKを遺伝子導入するなどの応用の可能性が広がったと考える.