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根尖性歯周炎への遺伝子治療適応のための基礎的研究

根尖周炎基因治疗适应基础研究

基本信息

批准号：
12877307
负责人：
岡田宏
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

根尖部歯周組織由来の初代培養細胞株の樹立にあたっては、まず、歯科矯正治療中の患者の便宜抜去歯から歯根膜組織を採取し、in vitro培養系にてout-growthさせ歯根膜細胞株を樹立した。また、歯周外科手術時に患者より採取した歯肉切片より、歯肉線維芽細胞株、および上皮系細胞のみを選択的に培養することができる培養液を用いて歯肉上皮細胞株を樹立した。次に、これら初代培養細胞株に外来性遺伝子の導入が可能か否かを検討した。遺伝子導入ベクターとしてpcDNA3.1(-)/Myc-Hisを選択し、外来性遺伝子として、LacZをpcDNA3.1(-)/Myc-Hisに組み込んだLacZリポーターベクターを構築した。これを各種歯周組織由来培養細胞株およびリンパ球系細胞株であるK562に、電気穿孔法あるいはリポソーム法にてトランジェントに遺伝子導入し、X-galにて細胞を染色することにより、LacZリポーターベクターの遺伝子導入効率を比較検討した。その結果、K562へは電気穿孔法により高い遺伝子導入効率を得ることができたが、一方、各種歯周組織由来の初代培養細胞株においては、電気穿孔法あるいはリポソーム法どちらの方法を用いた場合にも、非常に低いLacZリポーターベクターの遺伝子導入効率しか得ることができなかった。これは初代培養細胞株の細胞代謝活性が低いことに起因するものと考えられた。そこで、炎症性サイトカインであるIL-1を培養系に添加し、培養細胞を活性化した状態でのLacZリポーターベクター遺伝子導入を試みたところ、歯肉線維芽細胞株において、高率の遺伝子導入が認められた。これら実験結果より、根尖性歯周炎での炎症性組織への遺伝子治療を想定した場合、外来性遺伝子の病巣部位への選択的な遺伝子導入が可能であることが示唆され、遺伝子治療法開発への重要な知見が得られたものと考えられる。

The root canal tissue is derived from the primary culture cell line. The root canal tissue is taken from the root canal tissue of the patient in dental orthodontic treatment. The root canal cell line is established in vitro culture system. During dental surgery, the tissue sections of the patients were taken, and the epithelial cells were cultured in culture medium. Second, the possibility of introducing foreign genes into primary cultured cell lines is discussed. The gene introduced into pcDNA3.1(-)/Myc-His is selected, the foreign gene introduced into pcDNA3.1(-)/Myc-His is selected, LacZ is selected, LacZ is selected and constructed. To compare the efficiency of gene introduction in cultured cell lines derived from various peripheral tissues and spherical cell lines, such as K562, electroporation, X-gal staining, and LacZ staining. The results showed that K562 was the most effective method for the introduction of gene in vitro, and the rate of gene introduction in vitro was very low. The metabolic activity of primary cultured cell lines was low. IL-1 was added to the culture system, the cultured cells were activated, and the gene introduction was tested in vitro. As a result, when gene therapy for inflammatory tissue in apical periodontitis is envisaged, gene introduction into selected disease sites of foreign genes may be possible. This shows that important insights into the development of gene therapy have been obtained and examined.