新規プロテインキナーゼSIKのcAMP依存性核外移行の分子機構

新型蛋白激酶SIK依赖cAMP的核输出的分子机制

• 批准号: 12878116
• 负责人: 岡本 光弘
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12878116/
• 关键词: SIK; 副腎皮質; プロテインキナーゼ; ステロイドホルモン; ACTH; GFP; cAMP; PKA; 酵母2-ハイブリッド法

申請者が最近クローニングした塩誘導性キナーゼ(SIK)はN末端側にキナーゼドメインを有する新規のセリン/トレオニン・プロテインキナーゼである。これまでの実験の結果、非刺激時の副腎皮質細胞ではSIKは核内に存在するが、ACTHで刺激した細胞ではSIKが細胞質に存在すること、そしてSIKの細胞内移動がステロイドジェネシスの開始に重要であることが分かった。GFPを融合したSIKを作成してSIKの細胞内局在を詳細に検索した。その結果、静止状態のY1細胞ではSIKは核内に存在するが、Y1をACTHで刺激するとSIKは核から細胞質に出る。この移動は5分以内に完了する。核外への移動はレプトマイシンで阻害される。SIKの核外移行にはPKAが関与する。PKA活性を欠いたY1変異株(Kin-7)では観察されないが、PKA発現ベクターを共導入すると核外移行が起こる。PKAによってSIKのSer577がリン酸化されることがSIKの核外移行に重要である。そしてACTH刺激後のSIKの細胞内移動の時間経過は、SIKによるステロイド産生酵素遺伝子の発現抑制作用の時間経過を良く反映する。細胞質で生合成されたSIKタンパク質が細胞質から核に移行するのにはC末端側に位置する塩基性アミノ酸を比較的多く含む50アミノ酸残基が必要である。これらの結果は、ステロイドジェネシスのシグナル伝達機構の調節にSIKが細胞内移動を介してエッセンシャルな役割を演ずることを示唆している。

Applicants が recently ク ロ ー ニ ン グ し た salt induced キ ナ ー ゼ (SIK) は N terminal side に キ ナ ー ゼ ド メ イ ン を have す る new rules の セ リ ン / ト レ オ ニ ン · プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ で あ る. こ れ ま で の be 験 の results, the stimulation の adrenal cortex cells で は SIK は nuclear に exist within す る が, ACTH で stimulation し た cells で は SIK が cytoplasm に exist す る こ と, そ し て SIK の cellular mobile が ス テ ロ イ ド ジ ェ ネ シ ス の began に important で あ る こ と が points か っ た. GFPを fuses with た たSIKを to form <s:1> てSIK <s:1> intracellular localization in を detailed に検 cable た た. そ の results, static state の Y1 cells で は SIK は nuclear に exist within す る が, Y1 を ACTH で stimulus す る と SIK は nuclear か ら cytoplasm に る. Youdaoplaceholder6 に move する within 5 minutes に finish する. Exonuclear へ へ, へ, シ, シ, で, obstruction される. SIK has an extranuclear transition of に に PKAが related to する. PKA activity を owe い た Y1 - different strains (Kin - 7) で は 観 examine さ れ な い が, PKA 発 now ベ ク タ ー を total import す る と nucleus transitional が up こ る. PKAによってSIK <s:1> Ser577がリ <s:1> acidification される とが とがSIK <s:1> extranuclear migration に important である. そ し て ACTH stimulation の SIK の cellular mobile の time 経 は, SIK に よ る ス テ ロ イ ド produce enzymes heritage 伝 son の 発 inhibition の now good time 経 を く reflect す る. Cytoplasm で biosynthesis さ れ た SIK タ ン パ ク qualitative が cytoplasm か ら nuclear に transitional す る の に は C terminal side に す る salt basic ア ミ ノ acid を compare く more contain む 50 ア ミ ノ acid residues が necessary で あ る. こ れ ら の results は, ス テ ロ イ ド ジ ェ ネ シ ス の シ グ ナ ル 伝 of institutions の adjust に SIK が cellular mobile を interface し て エ ッ セ ン シ ャ ル cut を な service play ず る こ と を in stopping し て い る.

项目成果

Raza, F.S., et al.: "Identification of the rat adrenal zona fasciculata/reticularis specific protein, IZAg, as the putative membrane progesterone receptor"Eur. J. Biochem. 268. 2144-2147 (2001)

Raza, F.S. 等人：“大鼠肾上腺束状带/网状肌特异性蛋白 IZAg 的鉴定，作为推定的膜孕酮受体”Eur.

Takemori, H. et al.: "Characterization of a proximal element in the rat preadipocytefactor-1 (Pref-1) gene promoter"Eur. J. Biochem. 268. 205-217 (2001)

Takemori, H. 等人：“大鼠前脂肪细胞因子-1 (Pref-1) 基因启动子中近端元件的表征”Eur。

Sawaguchi, A., et al.: "Immunocytochemical demonstration of the secretory dynamics of zymogenic contents in rat gastric gland processed by high-pressure freezing/freeze substitution, with special references to phospholipase A2 and phospholipase Cgammal"Hi

Sawaguchi, A., et al.：“通过高压冷冻/冷冻替代处理的大鼠胃腺中酶原内容物的分泌动力学的免疫细胞化学演示，特别提到磷脂酶 A2 和磷脂酶 Cgammal”Hi

Doi, J., et al.: "Salt-inducible Kinase SIK represses PKA-mediated activation of human CYP11A promoter through the CREB's bZIP domain"J. Biol. Chem. (in press). (2002)

Doi, J. 等人：“盐诱导型激酶 SIK 通过 CREB ​​的 bZIP 结构域抑制 PKA 介导的人 CYP11A 启动子激活”J.

Lu, T., et al.: "Identification of essential residues for catalysis of rat intestinal phospholipase B/Lipase"Biochemistry. 40. 7133-7139 (2001)

Lu, T., 等人：“大鼠肠磷脂酶 B/脂肪酶催化必需残基的鉴定”生物化学。