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哺乳動物卵巣の凍結保存とその成否判定法の開発

哺乳动物卵巢的冷冻保存以及确定其成功或失败的方法的开发

基本信息

批准号：
12878158
负责人：
利部聰
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

目的:卵細胞の有効利用を目的として卵巣の凍結保存を試みた。方法:ウイスター今道成熟ラットを用いた。凍結保護剤として1.8モルエチレングリコール(EG)、1.3モルエチレングリコールモノメチルエーテル(EME)、1.6モルプロパンディオール(PROH)を使用した。移植した卵巣は発情後期のものに統一した。深麻酔後卵巣を取り出して細切し、室温下で0.3%BSA添加PBSに5分間静置後、0℃に2分間保持し、-6℃まで-1℃/分で冷却、-6℃で植氷・10分間保持、-30℃まで-0.3℃/分で冷却し液体窒素に投入した。その後14-21日間保存した。なお、これらの作業はすべて1mlのセラムチューブ内で行った。レシピエントとして偽妊娠6日目ラットを用いた。37℃の温湯で融解し、レシピエントの子宮腔内に観血的に移植した。移植7日後に移植卵巣を子宮とともに取り出し、定法によりパラフィン連続切片とした。非閉鎖卵胞を認めた移植卵巣を生着卵巣とみなした。結果:本実験の条件下では、EG区:12頭中3頭、EME区:12頭中4頭に、PROH区:10頭中1頭に生着を認めた。この結果は超急速凍結保存法に比べ生着率は高かったが有意な差ではなかった。

Objective: To explore the utilization of egg cells and their frozen preservation. Method: It's a mature way to use it. Freezing protection agents are used in the following ways: 1.8 ° C ° C (EG), 1.3 ° C ° C °Transplantation of eggs is the most important step in the process of development. After deep anesthesia, the eggs were taken out and finely cut. At room temperature, 0.3% BSA was added to PBS. After 5 minutes of standing, 0℃ for 2 minutes,-6℃ for-1℃/minute,-6℃ for planting,-10 minutes,-30℃ for-0.3℃/minute, cooling and adding liquid. After 14-21 days of preservation. For example, if you want to work in a factory, you can do it in 1ml.レシピエントとして伪妊娠6日目ラットを用いた。37℃ and warm soup to melt, 7 days after transplantation, the transplanted eggs were removed from the uterus, and the method was determined. Non-occlusive eggs are recognized and transplanted, and eggs are laid. Results: In this condition, EG area: 3 out of 12 heads, EME area: 4 out of 12 heads, PROH area: 1 out of 10 heads. The result is that the rate of rapid freezing preservation is higher than that of rapid freezing preservation.