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脂肪細胞の分化形質転換に関与する遺伝子の単離と機能解析

脂肪细胞分化和转化相关基因的分离和功能分析

基本信息

批准号：
12878168
负责人：
戸口田淳也
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12878168/
关键词：
脂肪細胞骨芽細胞分化形質転換脱分化

项目摘要

脂肪細胞の分化制御機構を理解するために、臨床材料及びマウス細胞を用いて以下の実験を行った。1.脱分化型脂肪肉腫の遺伝子解析脂肪細胞由来の悪性腫瘍である高分化型脂肪肉腫から脱分化を遂げて脂肪肉腫とは組織学的に全く異なる高悪性度肉腫細胞へ変化した症例における遺伝子変異を解析した。対象となった症例は3例であり、いずれも組織学的に分化した脂肪組織に類似した高分化型脂肪肉腫の部分と、高悪性度の紡錘形細胞肉腫で組織学的には悪性線維性組織球腫と考えられる部分が存在しており、それぞれよりDNA及びRNAを抽出した。まずMDM2遺伝子の増幅及び発現を解析した。高分化型の部分では、いずれの症例でも10倍以下の増幅が認められ、RNAレベルでの発現も認められた。対象として解析した良性の脂肪腫では、表層に発生したサイズも小型のものでは増幅は認められなかったが、深部に発生した大きな腫瘍では、組織学的には良性であっても高分化型脂肪肉腫同様に10倍以下の増幅が認められた。一方、悪性線維性組織球腫の部分では20倍から40倍の増幅が検出され発現レベルでも著しく亢進しており、MDM2遺伝子増幅の悪性変化への関連性が伺われた。2.p53ノックアウトマウスからの脂肪細胞の単離脂肪細胞と骨芽細胞との間の関連性を理解する材料として新生p53ノックアウトマウスの骨髄より間質細胞を単離培養し、リングクローニングにより多数のクローンを得た。それぞれのクローンにdexamethasonを添加し、培養を行い脂肪滴形成などの脂肪細胞への分化を示すクローンを3種類単離した。これらの細胞をdexamethason無添加の状態で長期間培養するvon Kossa染色陽性の結節を形成した。すなわち骨芽細胞へ分化することがプログラムされた細胞が培養条件の操作により脂肪細胞へと分化できることが明らかになった。このような形質は継代を経ても維持されており、分化誘導前後での遺伝子発現変異を解析する予定である。

Adipose cell differentiation control mechanisms are understood, clinical materials, and the use of adipocytes are described below. 1. Analysis of the origin of fat cells in dedifferentiated fat tumors and histological differences in highly differentiated fat tumors In 3 cases, there were histologically differentiated subcutaneous fat, similar to well-differentiated fatty swelling, and spindle cell swelling. Histologically, there were histologically differentiated linear fatty swelling, and DNA and RNA were extracted. The amplitude and appearance of MDM2 are analyzed. In the highly differentiated type, the amplitude of the disease was increased by less than 10 times, and the RNA was increased by less than 10 times. For benign lipomas, the surface layer develops small and large lipomas, the histological layer develops benign lipomas, and the amplitude is less than 10 times. The increase in the amplitude of linear tissue swelling was 20-fold to 40-fold, and the correlation between the increase in amplitude of linear tissue swelling and MDM2 was observed. 2. The relationship between adipocytes and bone bud cells was understood. The new materials were cultured in vitro and most of them were obtained. In addition, the adipocyte dexamethason was added to the culture medium, and the adipocyte differentiation was demonstrated by three kinds of isolation. The cells were cultured for a long time in the absence of dexamethason, and then von Kossa staining positive nodules were formed. Cell culture conditions for differentiation of adipocytes The change of gene expression before and after differentiation was analyzed.