TLSに関わるDNAポリメラーゼの人類遺伝学的解析

参与 TLS 的 DNA 聚合酶的人类遗传分析

• 批准号: 01J01206
• 负责人: 砂川 真弓 (湯浅 真弓)
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J01206/
• 关键词: 色素性乾皮症; ポリメラーゼη; XPV; 損傷乗り越え複製(TLS); 色素性乾皮症バリアント群; DNAポリメラーゼη; 損傷乗りこえ複製; TLS

我々は、色素性乾皮症バリアント群(XP-V)の原因遺伝子産物XPVが、UVにより生じる損傷であるシクロブタン型ピリミジンダイマー(CPD)に対し、正しい塩基を導入して複製を行うDNAポリメラーゼη(polη)であることを明らかにしている。しかし、polηの細胞内での動態や作用機構はまだほとんど明らかになっていない。私は、これまでの解析から、内在性polηには推定分子量に近い約80kDaのメジャーフォームと、90kDa位のマイナーフォームが存在することを明らかにした。polη cDNAをXP-V群患者由来細胞に導入したXP2SA/XPV(713)細胞において、この2つのpolηのフォームが検出された事から、この90kDa位のフォームは翻訳後修飾されたpolηのフォームであると示唆された。私はXP2SA/XPV(713)細胞にUV照射し、Triton可溶性と不溶性(核マトリックス)に分画して局在の変化をウエスタンブロットにより検出したところ、UV照射後に80kDa、90kDaのフォームはともに可溶性分が減少して不溶性分が増加した。これはUV照射後に損傷乗り越え複製を行う部位にpolηが集積した結果であると考えられる。一方、C末を欠失したXPV(511)は、これまでの解析により試験管内損傷乗り越え活性は保持していることが確認されている。XP2SA/XPV(511)で局在の変化を調べたところ、紫外線による変化は認められなかった。このことからpolηの局在の変化にはC末端が必要である事が示唆された。私はこのpolηの修飾の種類と修飾をうけたアミノ酸部位を明らかにするために、N末にFLAG、C末にHisタグをつけたpolη過剰発現細胞HeLa/FLAG polηHis細胞を確立し、この細胞よりNiNTAカラムと抗FLAG抗体カラムを用いてpolηを精製し、質量分析器により同定しようと解析を行っている。

The causes of xeroderma pigmentosum and xeroderma pigmentosum (XP-V) are XPV, UV, CPD, CPD, and pol. The mechanism of action of intracellular liquids, such as temperature, poly, and so on, should be clear that it is necessary to determine whether or not the mechanism is effective. Private analysis, internal pol η-presumed molecular weight close to 80kDa, temperature of 90 kDa, molecular weight of presumed molecular weight. The patients with pol η cDNA XP-V group were infected by XP2SA/XPV (713), pol (2), pol (1) and 90 kDa (90 kDa), respectively. Private XP2SA/XPV (713) cell UV irradiation, Triton soluble insolubility (nuclear insolubility), UV irradiation, 80kDa, 90kDa irradiation, low soluble fraction, low insoluble fraction, low soluble fraction, low insoluble fraction, low soluble fraction, After exposure to UV, we were able to replicate the site of pol η. The results showed that there were significant differences between the two groups. On the other hand, at the end of C, the missing XPV (511), the analysis of the tube, the more active, the more active. The XP2SA/XPV (511) office is in the field of communication and communication, and the UV line is in operation. Please tell me that it is necessary at the end of the C-terminal to show that you are instigated by the pol η. In this paper, the results of pol η repair are as follows: the detection of HeLa/FLAG pol η His cell, the detection of anti-FLAG antibody, and the detection of anti-FLAG antibody.